| 描述 |
E6446 是一种有效的、可口服的 TLR7 和 TLR9 拮抗剂,可用于有害炎症反应的研究。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
TLR7, TLR9[1]
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| 体外研究 |
E6446是一种有效且口服有效的TLR7和TLR9抑制剂。 E6446有效抑制HEK：TLR9细胞的DNA刺激,IC50值为10 nM,但抑制LPS内毒素刺激HEK：TLR4细胞或R848刺激HEK：TLR7细胞的效果显着降低。 E6446有效抑制由CpG2216诱导的IL-6产生,但对TLR3配体聚肌苷-胞嘧啶的诱导无效。 E6446抑制TLR7的能力是配体依赖性的,E6446是RNA诱导IL-6的有效抑制剂,但是小分子咪唑喹啉配体R-848诱导IL-6的抑制剂相对较差。 E6446在体外抑制TLR9-DNA相互作用,IC50在1至10μM范围内[1]。 E6446(0.01-0.03μM)用CpG ODN 2006特异性抑制TLR9活化,并阻断由咪唑喹啉化合物R848在2-8μM激活的TLR7/8。 E6446在30μM时减少50％的TLR4活化,并且在用oligo 2006刺激的HEK-TLR9细胞和用oligo 2216刺激的人PBMC中分别显示0.01μM和0.23μM的IC50 [2]。
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| 体内研究 |
E6446(20 mg/kg,po)几乎完全抑制CpG1668诱导的IL-6产生,并且剂量依赖性地抑制20和60mg/kg小鼠中ANA(抗核抗体)的发展[1]。 E6446(20,60mg/kg,po)剂量依赖性地抑制小鼠中的TLR9信号传导。 E6446(60,120 mg/kg,po)可防止TLRs和LPS诱导的啮齿动物疟疾脓毒性休克的高反应性,降低急性疟疾期间的TLR反应性,抑制TLR7和TLR9的激活[2]。
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| 细胞实验 |
响应于寡核苷酸CpG1668的刺激，测定E6446抑制BALB / c小鼠脾白细胞介素-6（IL-6）的产生。在添加TLR激动剂之前，将E6446添加至解离的脾细胞（在96孔板中在完全RPMI / 10％胎牛血清中每孔5×105）。刺激细胞72小时，取出上清液用于IL-6的ELISA分析。通过在含有100ng / mL Flt3配体的RPMI中培养BALB / c骨髓细胞7天来产生小鼠骨髓来源的树突细胞（BMDC）。在用各种TLR配体刺激过夜或24小时后，测定50μL中的细胞（1×105）的IL-6产生。对于使用人外周血单核细胞的研究，从健康志愿者供体分离Ficoll分离的单核细胞，洗涤，并在完全RPMI中用刺激性寡核苷酸CpG2216铺板72小时。通过ELISA定量上清液中的干扰素[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[1] MRL / lpr小鼠每周口服给药5次，从5周龄开始用20或60mg / kg E6446或60mg / kg羟基氯喹。每10天以50mg / kg ip施用Cytoxan。在治疗开始前立即采集血清样品以监测自身反应性抗体的变化。随后，大约每月收集血清样品，并在1：500稀释后通过ELISA分析抗dsDNA。体重和尿液样本以相同的间隔进行，蛋白尿由ChemStrips评估。使用市售的HEp2载玻片试剂盒评估抗核抗体（ANA），在试剂盒缓冲液中将血清稀释至1：100。 ANA分数被盲读[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Lamphier M, et al. Novel small molecule inhibitors of TLR7 and TLR9: mechanism of action and efficacy in vivo. Mol Pharmacol. 2014 Mar;85(3):429-40. [2]. Franklin BS, et al. Therapeutical targeting of nucleic acid-sensing Toll-like receptors prevents experimental cerebral malaria. Proc Natl Acad Sci U S A. 2011 Mar 1;108(9):3689-94.
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