| 体内研究 |
实时监测视网膜血管中的Cy5.5标记纳米颗粒(Cy5.5-PLGA)。指南(以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)[2]。1.静脉注射新制备的Cy5.5-PLGA悬浮液(再次悬浮在0.5 ml 1%泊洛沙姆188中,轻轻旋涡,使用前在环境温度下静置30 min)(0.5 ml)。2.麻醉大鼠,用新肾上腺素POS 5%治疗眼睛,放松虹膜,使用Vidisic眼胶保护眼睛不干燥,并用作隐形眼镜的浸泡介质。3.将大鼠固定在共焦扫描显微镜下,眼睛位于物镜下方工作距离处,并将插管插入尾静脉。4.观察视网膜荧光,并在不同时间点(0、1、3、5、15、30、60、90分钟)拍摄图像。注：在所有体内成像过程中,大鼠都放在加热板上。5.在体内实时成像后,用过量的上述麻醉剂对大鼠实施安乐死,摘除眼球并放入冷却的HEPES缓冲溶液中(135 mM NaCl、5 mM NaOH、2.5 mM KCl、7 mM MgCl2、10 mM HEPES、10 mM葡萄糖；pH7.4)。6.取出眼前段和玻璃体,小心分离整个视网膜,将其平放在改良的培养板上。7.用0.1 mg/mL Hoechst 33342(HY-15559)在HEPES溶液中培养整个样品20分钟,以进行细胞核染色。8.用4%多聚甲醛溶液固定平板视网膜20分钟,然后用HEPES溶液清洗。9.视网膜平架准备好后,立即用显微镜拍摄图像。
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