体外研究 |
指南(以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)。细胞标记(例如A549细胞)[1][2]:1.在2 mL培养基中,以3×104(因细胞而异)的密度将细胞接种到35 mm的玻璃底皿中。2.添加Ac4ManNAz(50µM,最终浓度),孵育3天(在细胞表面生成叠氮基)。3.用DPBS(pH 7.4)清洗电池两次。4.用氰化物5 DBCO(20µM,最终浓度)在37℃下培养细胞1小时。5.用DPBS(pH 7.4)冲洗细胞,并在25℃下用甲醛-戊二醛复合固定剂固定15分钟。6.用DPBS(pH 7.4)清洗细胞两次,并用DAPI染色细胞,以标记细胞核。7.使用共焦激光扫描显微镜测量氰化物5 DBCO荧光(Ex=635 nm,Em=650-700 nm)。注:1)用Ac4ManNAz治疗后,细胞表面人工引入的叠氮基团可被氰化物5 DBCO靶向3天以上。2) 氰化物5 DBCO标记的程度呈剂量依赖性。
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体内研究 |
指南(以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)。体内细胞追踪[1][2]:1.在2 mL生长培养基中,以3×104(因细胞而异)的密度将细胞接种到35 mm玻璃底皿中。2.添加Ac4ManNAz(50µM,最终浓度),孵育3天(在细胞表面生成叠氮基)。3.用DPBS(pH 7.4)清洗电池两次。4.对小鼠进行麻醉,然后将细胞(Ac4ManNAz治疗后)注入肝左叶。5.尾静脉注射青霉素5 DBCO(25µM,200µL)(肝细胞注射后3天)。6.测量氰化物5 DBCO荧光(Ex=635 nm,Em=650-700 nm)。利用体内成像系统获得体内近红外荧光(NIRF)图像。
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