fura red

呋喃红是一种对Ca2+敏感的荧光染料,随着[Ca2+][1]的增加,荧光强度降低。

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指南[2](以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)。细胞标记：1.根据您的常规方案培养细胞。2.将细胞以1x107个/mL的速度悬浮在37°C Hanks平衡盐溶液(HBSS)中,含1μM Fura Red,AM(除非另有规定)和0.01%Pluronic F127,并在37°C水浴中培养30分钟。3.在HEPES缓冲盐溶液(含1mM CaCl2、0.5mM MgCl2、0.1%BSA、10mM HEPES的HBSS)中清洗细胞,并在HEPES缓冲盐溶液中用活性染料SYTOX Green再次悬浮至1x107个细胞/mL。4.平衡电池≥在37°C水浴中浸泡10分钟。5.在流式细胞仪、荧光显微镜或荧光微孔板阅读器上分析样品。通过紫激光(406 nm)和绿激光(532 nm)的激发测量呋喃红的比例分析。发射由两个不同的滤波器组检测：在紫罗兰激光器(630LP和660/20 BP)上监测发射的增加,而在绿光激光器(685LP和710/50 BP)上检测发射的减少。

[1]. Floto RA, et al. IgG-induced Ca2+ oscillations in differentiated U937 cells; a study using laser scanning confocal microscopy and co-loaded fluo-3 and fura-red fluorescent probes. Cell Calcium. 1995 Nov;18(5):377-89.

[2]. Wendt ER, et al. Ratiometric analysis of fura red by flow cytometry: a technique for monitoring intracellular calcium flux in primary cell subsets. PLoS One. 2015 Apr 2;10(3):e0119532.