Biotin-16-UTP

生物素-16-UTP是RNA聚合酶的活性底物。生物素-16-UTP可以在RNA标记的体外转录反应中取代UTP[1]。

研究领域 >> 其他

信号通路 >> 其他 >> 其他

指南(以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)。体外RNA合成和纯化：1.根据您的常规方案培养细胞。2.将一体积的转录缓冲液2x[200 mM KCI,20 mM Tris HCI,pH 8.0,5 mM MgCl2,4 mM二硫苏糖醇(DTT),ATP,GTP和CTP各4 mM,200 mM蔗糖和20%甘油轻轻加入冰中的细胞核,形成混合物。3.向混合物中添加8μL生物素16-UTP(10 mM四锂盐),在29°C下培养30分钟。4.加入6μL 250 mM CaCl2,6μL无RNase DNase I(10 U/μL),在29°C下孵育10分钟,停止反应。5.根据制造商的说明,对核运行和总RNA进行RNA纯化。6.在50 uL二乙基焦碳酸酯(DEPC)处理过的水中再悬浮RNA。7.用涂有链霉亲和素的磁珠捕获标记的RNA。然后使用RNA结合珠进行随机六聚体引物逆转录。

[1]. G Patrone, et al. Nuclear run-on assay using biotin labeling, magnetic bead capture and analysis by fluorescence-based RT-PCR. Biotechniques. 2000 Nov;29(5):1012-4, 1016-7.