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1, 6-二磷酸果糖钠

1, 6-二磷酸果糖钠用途

荧光素二磷酸四铵是一种荧光染料,它可以用作荧光底物并生成荧光素作为荧光产物[1][2][3]。

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1, 6-二磷酸果糖钠名称

[ CAS 号 ]:
217305-49-2

[ 中文名 ]:
二磷酸荧光素硫酸四氨盐

[ 英文名 ]:
FDP

[中文别名 ]:

[英文别名 ]:

FDP,TETRAAMMONIUM SALT
fructosc diphosphate sodium
FDP
Esafofina
FDP [Fluorescein diphosphate,tetraammonium salt]

1, 6-二磷酸果糖钠生物活性

[ 描述 ]:

荧光素二磷酸四铵是一种荧光染料,它可以用作荧光底物并生成荧光素作为荧光产物[1][2][3]。

[ 相关类别 ]:

研究领域 >> 其他

信号通路 >> 其他 >> 其他

[体外研究]

荧光素二磷酸四铵可用作荧光底物,并获得荧光素作为荧光产物[1]。荧光素二磷酸四铵(50μM；室温)可用作体外磷酸酶测定的底物[2]。指南(以下是我们推荐的方案。该方案仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)。毛细管免疫传感器ELISA(单步ELISA)[3]:1.将含有1%BSA的Tris缓冲液1中不同浓度的抗原放入毛细管免疫传感器。2.通过毛细管作用固定捕获抗体和酶联抗体,孵育预设时间,然后用注射器用1mL含有0.14 M NaCl和0.05%吐温20的50 mM Tris缓冲液(pH 7.4)清洗。3.通过在50 mM Tris缓冲液(pH 9)中加入过量体积(约100μL)的20μM FDP来检测荧光,培养时间为60分钟。

[参考文献]

[1]. Murakami Y, et al. On-chip capillary electrophoresis for alkaline phosphatase testing. Biosens Bioelectron. 2001 Dec;16(9-12):1009-14.

[2]. Gilmartin AG, et al. Allosteric Wip1 phosphatase inhibition through flap-subdomain interaction. Nat Chem Biol. 2014 Mar;10(3):181-7.

[3]. Tsutsumi E, et al. Single-step sandwich immunoreaction in a square glass capillary immobilizing capture and enzyme-linked antibodies for simplified enzyme-linked immunosorbent assay. Anal Sci. 2012;28(1):51-6.

1, 6-二磷酸果糖钠物理化学性质

[ 分子式 ]:
C₂₀H₂₆N₄O₁₁P₂

[ 分子量 ]:
560.38800

[ 精确质量 ]:
560.10700

[ PSA ]:
199.99000

[ LogP ]:
6.45520

[ 储存条件 ]:
-20°C

1, 6-二磷酸果糖钠制备

方法一、酶转化法

酶液制备取经多代发酵应用过的酵母渣；悬浮与适量的蒸馏水中， -20℃ 反复冻融3次即得酶液。

酵母渣(含FDP合成酶)[- 20 ℃ ]→酶液

转化、除杂蛋白上述酶液中加入底物(8%得蔗糖，4%NaH2PO4，0.29%MgCl2，pH6.5)于 30℃ 反应6h，再煮沸5min，离心除去杂蛋白即得转化清液。

酶液[底物]→[ 30 ℃ , 6h]转化液[煮沸]→[30min]转化清液

吸附、洗脱转化清液通过DEAE-C阴离子交换柱层析，用蒸馏水洗涤至pH7.0，然后进行分离洗脱，收集洗脱液加入CaCl2生成其钙盐沉淀，过滤，得FDP钙盐。

转化清液[DEAE-C交换柱，水]→[pH7.0]洗脱液[CaCl2]→FDP钙盐

转化、成钠盐 FDP钙盐悬浮于水中，用732[H+]树脂将其转成 FDPH4，用2mol/L NaOH调pH至5.3-5.8成FDPNa3粗品。通过超滤、除菌、去热原、冻干即得FDPNa3精品。

FDP钙盐[732[H+]树脂]→FDPH4[2mol/L NaOH]→[pH5.3-5.8]FDPNa3粗品[过滤]→[除菌，支热原]超滤液→[冻干]FDPNa3精品

方法二、固定化细胞制备法

FDP产生菌的培养啤酒酵母接种于麦芽汁斜面培养基上 26℃ 培养24h，转入种子培养基中，培养至对数生长期，转种于发酵培养基中，于 28℃ 发酵培养24h，静置一周，离心，收集菌体。

FDP产生菌种子[培养基]→[ 26 ℃ , 24h]FDP产生菌体

固定化细胞的制备取活化菌体用等体积生理盐水悬浮，预热至 40℃ ，另用4倍量的生理盐水加热溶解卡拉胶(卡拉胶用量为 3.2g /L)，两者于 45℃ 混合搅拌10min，倒入成型器皿中，4 -10 ℃ 冷却30min，加入等量的 22.2g /L KCl液浸泡硬化4h，切成 3mm × 3mm × 3mm 小块即成。

FDP产生菌体[卡拉胶，KCl]→[4h]固定化细胞

固定化细胞的活化用含底物的表面活性剂，于 35℃ 浸泡活化固定化细胞24h，以0.3mol/L KCl液洗涤后浸泡生理盐水中备用。

固定化细胞[0.3mol/L KCl, NaCl]→[ 35 ℃ , 24h]活化固定化细胞

转化、除杂蛋白用活化固定化细胞充填柱反应器，以上行法，通入 30℃ 底物溶液(内含8%蔗糖，4%NaH2PO4，0.3%ATP，0.29%MgCl2)收集转化液，除去杂蛋白得转化清液。

活化固定化细胞[底物]→[ 30 ℃ ]转化液[除杂蛋白]→转化清液

吸附、洗脱、成钙盐将转化清液通过已处理好的DEAE-C阴离子交换柱，洗涤，再洗脱，收集洗脱液加入适量的CaCl2，生成FDP钙盐沉淀。

转化清液[DEAE-C柱]→洗脱液[CaCl2]→FDP钙盐

转酸、成钠盐取FDP钙盐悬浮于无菌水中，用732[H+]树脂将其转成FDPH4，用2mol/L NaOH调pH至5.3-5.8成钠盐，活性炭脱色，超滤，冻干，得FDPNa3精品。

FDP钙盐[732[H+]树脂]→FDPH4[2mol/L NaOH]→[pH5.3-5.8]FDPNa3[超滤]→超滤液[冻干]→FDPNa3精品。