二磷酸莫替沙尼的作用和生物活性

二磷酸莫替沙尼是多受体酪氨酸激酶抑制剂的口服生物可利用的二磷酸盐，具有潜在的抗肿瘤活性。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍二磷酸莫替沙尼的生物活性：

1）体外活性
在VEGF诱导的HUVECs细胞中（IC50=10nM），二磷酸莫替沙尼明显抑制细胞增殖。对于血小板衍生因子诱导的增殖（IC50=207nM）和SCF诱导的c-kit磷酸化（IC50=37nM），它能够显著抑制。人脐静脉内皮细胞，二磷酸莫替沙尼增强细胞对于放射性的敏感程度。对人VEGFR家族，它具有广谱活性。

2）体内活性
在大鼠角膜模型中，每天口服两次（ED50=2.1mg/kg）或一次（ED50=4.9mg/kg）二磷酸莫替沙尼能够抑制血管内皮生长因子诱导的血管生成。在头部和颈部鳞状细胞癌移植瘤模型中，它和辐射治疗联用，显示出显著地抗癌活性。

我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）动物实验
动物模型：具有诱导角膜血管生成的FeSprague-Dawley大鼠和用A431细胞注射s.c.的feCD-1nu/nu小鼠。

2）细胞实验
用不同浓度的莫特塞尼二磷酸盐将细胞预孵育2小时，并用50ng/mLVEGF或20ng/mLbFGF再暴露72小时。用DPBS洗涤细胞两次，并将板在-70℃下冷冻24小时。通过添加CyQuant染料评估增殖，并在Victor1420工作站上读取平板。使用Levenberg-Marquardt算法将IC50数据计算为四参数逻辑方程。

3）激酶实验
体外激酶测定：使用均相时间分辨荧光（HTRF）测定法为每种酶建立最佳酶，ATP和底物（胃泌素肽）浓度。使用每种酶的ATP浓度为三分之二Km，对每种酶以10点剂量反应曲线测试莫特塞尼二磷酸盐。大多数测定由与激酶反应缓冲液[20mMTris-HCl（pH7.5），10mMMgCl2,5mMMnCl2,100mMNaCl，1.5mMEGTA]混合的酶组成。

在每次测定之前加入终浓度为1mMDTT，0.2mMNaVO4和20μg/mLBSA。对于所有测定，在HTRF反应之前立即加入5.75mg/mL链霉抗生物素蛋白-别藻蓝蛋白和0.1125nMEu-PT66。将板在室温下孵育30分钟并在Discovery仪器上读数。使用Levenberg-Marquardt算法将IC50值计算为四参数逻辑方程。

今天介绍了二磷酸莫替沙尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，二磷酸莫替沙尼是一种有效的VEGFR1/2/3的ATP竞争性抑制剂，IC50值为2nM/3nM/6nM，与对Kit的选择性相似，是PDGFR和Ret的10倍多。它的靶点活性为Kit,8nM；VEGFR1,2nM；VEGFR2,3nM；VEGFR2/Flk1,6nM；VEGFR3,6nM。

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参考文献：
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