厚朴酚的作用 - 生物活性 - 靶点活性

厚朴酚，英文名是Magnolol，CAS号528-43-8，它是一种天然木脂素，从厚朴的茎皮中分离出来，是RXRα和PPARγ的双重激动剂，EC50值分别为10.4μM和17.7μM。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍厚朴酚的生物活性：

1）体外活性
厚朴酚是RXRα和PPARγ的双重激动剂，EC50值分别为10.4μM和17.7μM。厚朴酚（26.2-80μM）以剂量依赖性方式结合RXRαLBD和PPARγLBD，Kd值分别为45.7μM和1.67μM。厚朴酚（1-20μM）以剂量依赖性方式诱导PPRE的转录，但对RXRE转录没有活性[1]。厚朴酚（1,3,10μM）在胰岛素存在下增强3T3-L1前脂肪细胞和C3H10T1 / 2多能干细胞的脂肪细胞分化。厚朴酚（10μM）上调脂肪细胞分化的标记基因的mRNA表达。厚朴酚（1,10μM）显示分化的3T3-L1脂肪细胞中基础和胰岛素刺激的葡萄糖摄取增加[2]。

2）体内活性
厚朴酚（5-15mg / kg，口服）显着减弱小鼠中葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎的表型严重性。厚朴酚（10,15 mg / kg，po）减弱DSS处理小鼠结肠中的组织病理学变化和髓过氧化物酶活性，降低DSS诱导的结肠组织中高水平的促炎细胞因子TNF-α，IL-1β和IL-6。 厚朴酚（10 mg / kg，口服）也可以逆转血清代谢组的异常，并调节小鼠的色氨酸代谢途径[3]。

我们已经了解了厚朴酚的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
对于3T3-L1前脂肪细胞的分化，在汇合后2天（定义为第0天），将细胞在含有0.5mM IBMX，10μg/ mL胰岛素和0.25μMDEX的分化培养基中在含有10％胎牛血清的DMEM中孵育（FBS）。2天后，将细胞培养基更换为含有10μg/ mL胰岛素和10％FBS的DMEM。 2天后，用含有10％FBS的新鲜DMEM再次更换培养基。

在分化开始后6-8天使用脂肪细胞。 在脂肪生成研究中，在含有10％FBS的10％FBS中含有/不含有厚朴酚的胰岛素（1μg/ mL）处理3T3-L1前脂肪细胞和在补充有10％牛小牛血清（第0天）的DMEM中生长的C3H10T1 / 2多能干细胞。DMEM在指定浓度下持续9天。每3天补充含有胰岛素（1μg/ mL）和含有/不含厚朴酚的10％FBS的新鲜培养基[2]。

2）动物实验
通过常规施用溶解于饮用蒸馏水中的浓度为2.0％（w / v）的葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液连续5天诱导实验性结肠炎小鼠模型。在同一时期给予正常组小鼠蒸馏水。每天早晨（上午9点）记录每只小鼠的体重。在第6天，具有显着体重减轻，腹泻和大出血的小鼠被认为是结肠炎的实验候选者。

将具有可比疾病指数的所有小鼠随机分成5组（n = 8 /组）:( 1）DSS模型组，用生理盐水灌胃; （2）阳性对照组，腹腔注射英夫利昔单抗（5 mg / kg）; （3）低剂量治疗组，灌胃给予厚朴酚（5 mg / kg）; （4）中剂量治疗组，灌胃给予厚朴酚（10 mg / kg）; （5）高剂量治疗组，灌胃给予厚朴酚（15 mg / kg）。对照组小鼠在整个实验期间接受不含DSS的饮用水，并用生理盐水灌胃[3]。

3）激酶实验
使用Biacore 3000仪器分析厚朴酚对纯化的RXRαLBD和PPARγLBD的结合亲和力。使用在10mM乙酸钠缓冲液（pH 4.2）中的标准胺偶联程序将蛋白质共价固定到CM5芯片上。用连续流动的缓冲液（10mM HEPES，pH7.4,150mM NaCl，3mM EDTA，0.005％（v / v）表面活性剂P20）平衡芯片2小时。随后，将浓度梯度的厚朴酚以20μL/ min的流速注入通道中60秒，然后解离120秒。 对于共激活因子SRC1募集测定，将生物素标记的SRC1固定在SA芯片上。将不同浓度的厚朴酚与5μMRXRαLBD或PPARγLBD一起孵育1小时，然后以20μL/ min的流速注入通道60秒，然后解离120秒[1]。

今天介绍了厚朴酚的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，厚朴酚是RXRα（EC50 =10.4μM）和PPARγ（EC50 =17.7μM）的双重激动剂。它阻断TNF-α诱导的NF-κB活化。它的靶点活性是NF-κB，p53，PPARγ。

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参考文献：
[1]. Zhang H, et al. Molecular determinants of magnolol targeting both RXRα and PPARγ. PLoS One. 2011;6(11):e28253.
[2]. Choi SS, et al. Magnolol enhances adipocyte differentiation and glucose uptake in 3T3-L1 cells. Life Sci. 2009 Jun 19;84(25-26):908-14.
[3]. Zhao L, et al. Magnolol, a Natural Polyphenol, Attenuates Dextran Sulfate Sodium-Induced Colitis in Mice. Molecules. 2017 Jul 20;22(7). pii: E1218.