L-犬尿氨酸生物活性及实验方法

犬尿氨酸是用于生成烟酸的氨基酸色氨酸的代谢产物。L-犬尿氨酸是具有L构型的犬尿氨酸。 它具有人体代谢产物，酿酒酵母代谢产物和小鼠代谢产物的作用。 它是非蛋白原性L-α-氨基酸和犬尿氨酸，是L-犬尿喹啉的共轭酸，同时也是是D-犬尿氨酸的对映体以及L-犬尿氨酸两性离子的互变异构体。

L-犬尿氨酸生物活性详解：
1.体外生物活性
犬尿氨酸及其进一步分解产物具有多种生物学功能，包括在炎症期间扩张血管和调节免疫应答。 一些癌症会增加犬尿氨酸的产生，从而增加肿瘤的生长。 L-犬尿氨酸（Kyn）是芳烃受体（AHR）激动剂，其激活AHR指导的幼稚T细胞极化至抗炎Treg表型。 犬尿氨酸在H1L7.5c3细胞中以生理浓度激活AHR信号传导，并在24小时暴露后通过在H1L7.5c3小鼠肝细胞中诱导AHR调节的荧光素酶基因而充当AHR激动剂[1]。

2.体内生物活性
犬尿氨酸通过血管平滑肌中的Kv7通道扩张来自大鼠和人的动脉。 在大鼠中，这种色氨酸代谢产物引起低血压，这部分抵消了Kv7通道抑制[2]。 在缺氧缺血前1小时施用L-犬尿氨酸显示剂量依赖性显着的神经保护作用，在300mg / kg的剂量下完全保护。 该剂量的L-犬尿氨酸也阻断了大脑皮层中c-fos免疫反应的诱导[3]。

L-犬尿氨酸生物活性实验方法
1.细胞分析
使用H1L7.5c3细胞进行荧光素酶测定。 在指定的时间（0.5,2,4,6,12,18,24小时）和暴露于犬尿氨酸的浓度（0.1,1,10,100μM）下，从孵育中取出细胞并使其平衡至室温。15分钟。 平衡后，除去培养基，在室温下用DPBS洗涤细胞两次。 用20μL/孔1×Passive Lysis Buffer裂解细胞，并在室温下振荡20分钟。 使用光度计微孔板读数器记录荧光素酶活性。
2.动物管理
在7日龄大鼠中检查增加剂量的L-犬尿氨酸和/或没有丙磺舒对大脑皮层中犬尿喹啉酸浓度的影响。 每组检查六只动物。 动物用L-犬尿氨酸以100,200,300和400mg / kg的剂量或犬尿氨酸，200mg / kg用丙磺舒，50mg / kg治疗。 在1小时时杀死动物，迅速取出脑，解剖大脑皮层并置于0.5mL冷却的0.1M HCl中。 通过具有荧光检测的高效液相色谱法进行犬尿喹啉酸测量。 使用荧光测定法进行蛋白质测量。

由此可见，L-犬尿氨酸是用于生成烟酸的氨基酸L-色氨酸的代谢产物。它是一种芳香烃受体 (aryl hydrocarbon receptor) 激动剂，色氨酸代谢途径的中心化合物，因为它可以变成神经保护剂犬尿喹啉酸或神经毒性剂喹啉酸。这些内源性化合物的平衡可以在许多疾病中观察到，例如中风，癫痫，多发性硬化和肌萎缩侧索硬化。 它也可能发生在神经退行性疾病中，如帕金森病，亨廷顿病和阿尔茨海默病; 以及精神分裂症和抑郁症等精神障碍。

参考文献：
[1]. Moyer BJ, et al. Inhibition of the aryl hydrocarbon receptor prevents Western diet-induced obesity. Model for AHR activation by kynurenine via oxidized-LDL, TLR2/4, TGFβ, and IDO1. Toxicol Appl Pharmacol. 2016 Jun 1;300:13-24.
[2]. Sakakibara K, et al. Kynurenine causes vasodilation and hypotension induced by activation of KCNQ-encoded voltage-dependent K(+) channels. J Pharmacol Sci. 2015 Sep;129(1):31-7.
[3]. Nozaki K, et al. Neuroprotective effects of L-kynurenine on hypoxia-ischemia and NMDA lesions in neonatal rats. J Cereb Blood Flow Metab. 1992 May;12(3):400-7.