山奈苷的作用 - 生物活性 - 靶点活性

山奈苷，英文名Kaempferitrin，CAS号是482-38-2，它具有与5-羟色胺能系统相关的抗抑郁样作用，主要是5-HT1A。山奈苷对HeLa细胞发挥细胞毒性和抗肿瘤作用。它刺激葡萄糖代谢酶，促进葡萄糖稳态。而且对由脾细胞，巨噬细胞，PBMC和NK细胞介导的免疫应答发挥免疫刺激作用。山奈苷诱导细胞毒性作用包括：G1期细胞周期停滞和胱天蛋白酶依赖性途径中的内源性途径凋亡。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍山奈苷的生物活性：

1）体外活性
山奈苷激活胰岛素信号通路。在成熟的3T3-L1脂肪细胞中，山奈苷在1-20μM时存活率高于90％，并且存活率在25和50μM时迅速下降。山奈苷（15μM）增加胰岛素受体底物1的胰岛素受体β酪氨酸磷酸化和酪氨酸磷酸化，并且这种效果类似于10nM胰岛素的效果。

山奈苷（15μM）也刺激ser473的akt磷酸化，刺激可被PI3-K抑制剂渥曼青霉素阻断。山奈苷在15μM时有效地发挥GLUT4向脂肪细胞膜的转运，并且这被渥曼青霉素抑制。此外，山奈苷可增加成熟3T3-L1脂肪细胞中分化细胞和分泌脂联素的Glu4蛋白总水平[1]。山奈苷对人癌细胞如HeLa和MDA-MB231细胞具有细胞毒性，IC50为45±2.6和65±2.6μM，对非致瘤细胞显示低毒性作用。

山奈苷（45μM）在治疗24和48小时后诱导HeLa细胞凋亡，并在HeLa细胞中引起活性氧（ROS）的产生。此外，山奈苷（45μM）发挥G1期阻滞作用，导致与细胞凋亡内在途径相关的蛋白质表达，并激活HeLa细胞中的caspase 3 [2]。

2）体内活性
山奈苷（2.5,10和25 mg / kg，ip）显着抑制肿瘤生长40％，87％和97％，并且在nu / nu小鼠中肿瘤重量分别降低37％，81％和95％ HeLa肿瘤。山奈苷还抑制细胞增殖并延长携带肿瘤的小鼠的寿命[2]。

我们已经了解了山奈苷的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的两种方法：

1）细胞实验
通过MTT测定进行活力测定。将预融合的3T3-L1前脂肪细胞接种以达到汇合。在汇合后（第0天）立即加入山奈苷代替胰岛素，并在加入化合物后3小时测量活力。在第8天进行另一次细胞活力测定。对于山奈菌素与胰岛素处理组合，从第0天到第8天同时加入各种浓度的山奈菌素和0.2nM胰岛素。在分化期间（第0天至第8天）没有胰岛素或山奈素处理的细胞 用作对照。最后，为了验证用胰岛素或山奈素处理成熟的3T3-L1细胞24-48小时的细胞活力，将MTT在化合物处理的24小时和48小时结束时孵育3小时，并计算存活率和 与没有胰岛素或山奈素的情况相比[1]。

2）动物实验
将nu / nu小鼠的背部皮下注射HeLa细胞（1.5×106）。肿瘤植入后4小时，5只小鼠组接受2.5至25mg / kg剂量的山奈苷，溶于0.1mL 0.9％盐水溶液，1mg / kg顺铂（CDDP）或1mg / kg注射紫杉醇（PCX） 每天腹腔注射32天。动物对照组接受0.1mL载体溶液。使用游标卡尺测量肿瘤，并计算它们的尺寸（mm3）肿瘤体积=长度×宽度×高度2。在实验结束时，处死动物并切除肿瘤并称重[2]。

今天介绍了山奈苷的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，山奈苷Kaempferitrin是一种天然黄酮苷类化合物，具有镇痛、消炎、抗糖尿病、抗肿瘤和化疗的作用，同时可激活胰岛素 (insulin) 信号传导。它的靶点活性是cell cycle arrest，PFK。

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参考文献：
[1]. Tzeng YM, et al. Kaempferitrin activates the insulin signaling pathway and stimulates secretion of adiponectin in 3T3-L1 adipocytes. Eur J Pharmacol. 2009 Apr 1;607(1-3):27-34.
[2]. Alonso-Castro AJ, et al. Kaempferitrin induces apoptosis via intrinsic pathway in HeLa cells and exerts antitumor effects. J Ethnopharmacol. 2013 Jan 30;145(2):476-89.