人参皂苷CK的作用 - 生物活性 - 靶点活性

人参皂苷CK，英文名Ginsenoside C-K，CAS号是39262-14-1，它是一种人参皂苷Rb1的细菌代谢物。人参皂苷C-K 通过抑制诱生型一氧化氮合酶 (iNOS) 和 COX-2 来发挥抗炎作用。在人肝微粒体中，人参皂苷C-K 抑制 CYP2C9 和 CYP2A6 活性，IC50 分别为 32.0±3.6 μM和 63.6±4.2 μM。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍人参皂苷CK的生物活性：

1）体外活性
人参皂甙C-K是G-Rb1的细菌代谢产物，主要通过减少诱导型一氧化氮合酶（iNOS），环氧合酶（COX）-2和促炎细胞因子而表现出抗炎作用。人参皂甙C-K通过下调LPS处理的鼠腹膜巨噬细胞中IRAK-1，MAPK，IKK-α和NF-κB的活性来抑制促炎细胞因子的表达。人参皂甙C-K还通过抑制LPS刺激的RAW264.7细胞中的NF-κB信号传导来抑制iNOS和COX-2的表达。在酵母多糖处理的骨髓衍生的巨噬细胞（BMDM）和RAW264.7细胞中，人参皂甙C-K通过负调节促炎细胞因子的分泌，MAPK的活化和ROS的产生来抑制炎症反应。

此外，在LPS刺激的小胶质细胞中观察到人参皂苷C-K的抗炎活性。人参皂甙C-K通过控制ROS的产生和MAPK，NF-κB和AP-1的活性来阻止炎症反应[1]。人参皂苷C-K是胃肠道中人参皂甙的主要代谢产物，以PXR依赖性方式抑制NF-κB信号传导。显示人参皂甙C-K通过抑制NF-κB活化促进葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的结肠炎的恢复。人参皂甙C-K显着降低TNF-α诱导的IL-1β和iNOS mRNA水平的上调，并恢复LS174T细胞中PXR和CYP3A4的mRNA水平[2]。

人参皂苷CK是20（S） - 原人参二醇衍生物的肠道代谢产物之一，对人肝微粒体中的CYP2C9活性具有抑制作用，IC50值为32.0±3.6μM，对人肝脏中CYP2A6活性的抑制作用较弱IC50值为63.6±4.2μM的微粒体，对人肝微粒体中CYP2D6活性的抑制作用更弱，IC50值超过100μM[4]。

2）体内活性
在注射乳剂后第3天开始，胶原诱导的关节炎（CIA）小鼠的重量缓慢增加并且显着低于正常DBA / 1小鼠的重量。在注射乳剂后，人参皂甙C-K（28,56和112mg / kg）小鼠的体重恢复d 32。与CIA小鼠相比，人参皂甙C-K（56和112mg / kg）和甲氨蝶呤（MTX）处理的（2mg / kg）小鼠在d 50时显示出显着增加的体重。在免疫后第24天开始后爪肿胀。从第28天到第50天治疗CIA小鼠。从第24天开始每4天测量一次关节炎评分。人参皂甙C-K（56和112mg / kg）在第51天显着降低小鼠的关节炎评分[3]。

我们已经了解了人参皂苷CK的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的两种方法：

1）细胞实验
将LS174T细胞接种在细胞成像培养皿中。孵育过夜后，用人参皂苷提取物（GSE）（100μg/ mL），Rb1（10μM）或人参皂苷CK（10μM）处理细胞3小时，然后在有或没有TNF-α的情况下进行额外孵育（ 20 ng / mL）6小时。在温育结束时，收获细胞并用4％多聚甲醛溶液在20℃固定20分钟。

在PBS中洗涤后，在室温下用含0.2％Triton X-100的PBS透析细胞5分钟。在含有0.1％Triton X-100和5％牛血清白蛋白的封闭缓冲液中孵育后，将细胞与兔NF-κBp65抗体在4℃下孵育过夜，然后在室温下与Alexa Fluor 488缀合的抗兔IgG抗体孵育。在PBS中的1％牛血清白蛋白中保持30分钟。使用Zeiss 710共聚焦显微镜[2]获得荧光照片。

2）动物实验
小鼠[3]-使用无特定病原体的DBA / 1小鼠（雄性，18±2g）。DBA / 1小鼠皮内注射两次，其中0.1mL该乳剂（含有100mg鸡II型胶原（CII）/小鼠）位于尾巴的背部和尾部。第一次免疫的日期定义为d 0，并且在第21天将加强注射施用于背部。在关节炎发作后，将动物随机分成5组，每个实验组由10只小鼠组成。CIA小鼠每天一次胃内施用人参皂甙C-K（28,56或112mg / kg）或免疫后第28天至第51天每3天一次MTX（2mg / kg）。正常和CIA小鼠同时给予等体积的载体（CMC-Na）[3]。

今天介绍了人参皂苷CK的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，人参皂苷C-K是G-Rb1的细菌代谢产物，通过减少iNOS和COX-2而表现出抗炎作用。它的靶点活性是cell cycle arrest。

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参考文献：
[1]. Kim JH, et al. Role of ginsenosides, the main active components of Panax ginseng, in inflammatory responsesand diseases. J Ginseng Res. 2017 Oct;41(4):435-443.
[2]. Zhang J, et al. Ginsenosides Regulate PXR/NF-κB Signaling and Attenuate Dextran Sulfate Sodium-Induced Colitis. Drug Metab Dispos. 2015 Aug;43(8):1181-9.
[3]. Liu KK, et al. Ginsenoside compound K suppresses the abnormal activation of T lymphocytes in mice with collagen-induced arthritis. Acta Pharmacol Sin. 2014 May;35(5):599-612.
[4]. Liu Y, et al. Ginsenoside metabolites, rather than naturally occurring ginsenosides, lead to inhibition of human cytochrome P450 enzymes. Toxicol Sci. 2006 Jun;91(2):356-64.