LY2606368 dihydrochloride的作用 - 生物活性 - 靶点活性

LY2606368 dihydrochloride，CAS号是1234015-52-1，它是ATP竞争性CHK1抑制剂（Ki：0.9 nmol / L）。在无细胞试验中，对于CHK2和RSK，其IC50值分别为8nM和9nM。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍LY2606368 dihydrochloride的生物活性：

1）体外活性
在非临床研究中，LY2606368通过复制突变和pH2A.X（双链DNA断裂的标记）测量来诱导DNA损伤。用LY2606368处理细胞导致S期细胞群中TUNEL和pH2AX阳性双链DNA断裂的快速出现。在功能测定中，LY2606368有效地消除了p53缺陷型HeLa细胞中阿霉素激活的G2-M检查点，EC50为9nmol / L. LY2606368具有广泛的抗增殖作用，在最敏感的细胞系中IC50值通常<50 nmol / L，少数细胞系显示出相当大的抗性，IC50> 1,000 nmol / L. LY2606368需要CDC25A和CDK2才能导致DNA损伤。

2）体内活性
LY2606368作为单一疗法和与其他药剂组合抑制癌症异种移植物中的肿瘤生长。在原位SKOV3卵巢癌模型中，LY2606368显示抑制原发性肿瘤的生长并显着降低转移和腹水积聚的发生率。LY2606368也在SW1990原位胰腺癌模型中显示出功效，导致原发肿瘤生长抑制92％，淋巴结，脾脏和肠道转移消除。

我们已经了解了LY2606368 dihydrochloride的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的两种方法：

1）细胞实验
将HeLa细胞接种到T25烧瓶上并使其恢复24小时。然后加入LY2606368，使最终浓度为33或100nmol / L. 在一些实验中，在药物处理期间包括20μmol/ L Z-VAD-FMK。处理细胞12小时，并且在最后2小时期间，加入秋水仙碱至1μg/ mL。按照Bayani和Squire的方法进行中期扩散的细胞核固定。进行染色体扩散。

将3μl甲醇/乙酸固定剂中的12μL体积的细胞悬浮液从3cm的高度滴加到干燥的载玻片或盖玻片上。然后将载玻片在43℃金属块上加热45秒，然后除去以使其在室温下干燥完成。使用带有DAPI的Vectashield Hard Set封固剂将盖玻片固定在载玻片上。用Leica DMR荧光显微镜检查载玻片，并使用SPOT RT3 Slider相机捕获图像。

2）动物实验
LY2606368配制成由20％Captisol组成的载体。雌性CD-1 nu- / nu-小鼠（26-28g）用于该研究。通过在每只受试动物的后胁腹中的无血清生长培养基和基质胶的1：1混合物中皮下注射1×106Calu-6细胞来开始肿瘤生长。当肿瘤体积达到约150mm 3时，通过肿瘤大小和体重随机化动物并将其置于它们各自的治疗组中。

由20％Captisol pH4或LY2606368组成的载体通过皮下注射以200μL的体积施用。给药后4,8,12,24和48小时，通过心脏穿刺提取用于血浆药物暴露的血液，并在Sciex API 4000 LC / MS-MS系统上进行测定。迅速移除并准备异种移植组织。通过免疫印迹分析分析裂解物的蛋白质磷酸化水平。

今天介绍了LY2606368 dihydrochloride的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，LY2606368 dihydrochloride是一种有效的，选择性的，ATP 竞争性的 Chk1 抑制剂，Ki 值为 0.9 nM，对 CHK1 和 CHK2 的 IC50 值分别为 <1 nM 和 8 nM。它的靶点活性是Chk1，Chk2，RSK。

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参考文献：
[1]. King C, et al. LY2606368 Causes Replication Catastrophe and Antitumor Effects through CHK1-Dependent Mechanisms. Mol Cancer Ther. 2015 Sep;14(9):2004-1
[2]. Yin Y, et al. Chk1 inhibition potentiates the therapeutic efficacy of PARP inhibitor BMN673 in gastric cancer. Am J Cancer Res. 2017 Mar 1;7(3):473-483.