CCT245737的作用 - 生物活性 - 靶点活性

CCT245737是一种口服活性和选择性Chk1抑制剂（IC50：1.3 nM）; CCT245737对Chk2的活性显着降低（IC50：2440 nM）。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍CCT245737的生物活性：

1）体外活性
CCT245737（10μM）对一组124种激酶（包括ERK8，PKD1，RSK2和RSK1）的抑制率> 80％，IC50分别为130,298,361和362 nM [1]。CCT245737在HT29，SW620，MiaPaCa-2和Calu6细胞系中消除依托泊苷诱导的G2检查点，IC50范围为30-220nM [2]。

2）体内活性
CCT245737（150mg / kg口服）在HT29结肠癌异种移植物中与吉西他滨（100mg / kg iv）组合抑制肿瘤生长。CCT245737（300mg / kg，口服）也在SW620人结肠癌异种移植物中24小时抑制吉西他滨（60mg / kg静脉内）诱导的pSer296 CHK1自磷酸化[1]。单独的CCT245737（150mg / kg，p.o）显着抑制人B细胞淋巴细胞白血病的Eμ-Myc小鼠模型中的肿瘤生长[2]。

我们已经了解了CCT245737的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
细胞毒性被确定为使用96小时磺酰罗丹明B（SRB）测定法给予肿瘤细胞增殖50％抑制（GI50）的药物浓度。使用基于细胞的ELISA测量细胞内CHK1活性的抑制，以消除依托泊苷诱导的G2检查点（有丝分裂诱导测定，MIA）。使用UCN01作为阳性对照，在存在诺考达唑的情况下测定G2检查点消除（MIA）的IC50。

活性指数（AI）用作化合物相对于其毒性诱导有丝分裂的能力的量度（即，MIA IC50的比率：96小时SRB GI50）。使用固定浓度（GI50）的吉西他滨或SN38与一系列CCT245737浓度组合进行常规增强研究，以确定CCT245737的组合GI50。CCT245737增强吉西他滨或SN38细胞杀伤的能力表示为增强指数（PI）等于单独CCT245737的GI50与CCT245737的组合GI50的比率。PI值> 1表示基因毒性活性的增强。

此外，使用固定的，非毒性或极低毒性浓度的CCT245737（≤GI20）和一系列不同浓度的吉西他滨或SN38进行一系列实验，以确定CCT245737与基因毒物相比增加药物细胞毒性的程度。单独使用，即常规PI（单独比例GI50基因毒性：GI50基因毒性与无毒CCT245737浓度，Con PI结合）[2]。

2）动物实验
将人HT29结肠直肠癌细胞皮下注射到6-8周龄的雌性NCr无胸腺小鼠的侧腹中。移植后5天开始给药，此时肿瘤的平均直径为5.5mm。吉西他滨（100mg / kg静脉注射）在第0,7和14天用盐水给药，化合物4（CCT245737）和41（150mg / kg口服）在10％DMSO 20％PEG 400,5％吐温80,65％中给药。每次服用吉西他滨后24小时和48小时用水。测量肿瘤并每周记录三次体重。当肿瘤达到预定的人道终点（平均直径<15 mm）时，动物会逐个剔除[1]。

3）激酶实验
使用对应于激酶Km，ATP的ATP浓度的10μMCCT245737对124种人激酶进行商业体外33P放射性激酶测定。CHK2和FLT3的其他激酶IC50测定使用商业测定或在重组人CHK1内部在LabChip®EZReader II或CDK1上在DELFIA测定中进行[2]。

今天介绍了CCT245737的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，CCT245737 是一种可口服的，选择性的 Chk1 抑制剂，IC50 值为 1.3 nM。它的靶点活性是Chk1,1.4 nM (Cell-free)。

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参考文献：
[1]. Osborne JD, et al. Multiparameter Lead Optimization to Give an Oral Checkpoint Kinase 1 (CHK1) Inhibitor Clinical Candidate: (R)-5-((4-((Morpholin-2-ylmethyl)amino)-5-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl)amino)pyrazine-2-carbonitrile (CCT245737). J Med Chem. 2016 Jun 9;59(11):5221-37.
[2]. Walton MI, et al. The clinical development candidate CCT245737 is an orally active CHK1 inhibitor with preclinical activity in RAS mutant NSCLC and Eμ-MYC driven B-cell lymphoma.