【NMS-1286937】作用 - 生物活性 - 靶点活性

NMS-1286937，别名NMS-P937，CAS号是1034616-18-6。它是一种口服，特异性Polo样激酶1（PLK1）抑制剂，IC50为2 nM。NMS-P937对PLK1的特异性比PLK2 / PLK3高5000倍。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍NMS-1286937的生物活性：

1）体外活性
NMS-1286937是一种有效的，选择性和口服的PLK1抑制剂，IC50为2nM。NMS-1286937还显示出针对FLT3，MELK和CK2的抑制活性，IC50分别为510,744和826nM [1]。NMS-P937具有纯ATP竞争机制，具有可逆解离且无时间依赖性。NMS-P937（10μM）具有选择性，对PLK2和PLK3的抑制率分别为48％和40％。NMS-P937显示针对一组137个细胞系的抗增殖活性，对于137个细胞系中的60个，IC 50值低于100nM，对于137个细胞系中的9个，IC 50值高于1μM[2]。NMS-P937显示对AmL-NS8细胞的细胞毒活性，IC50为36 nM [3]。

2）体内活性
NMS-1286937（45mg / kg，i.v。）显示良好的肿瘤生长抑制，在用人HCT116结肠腺癌细胞异种移植的CD1 nu / nu小鼠中具有可接受的和可逆的体重减轻。NMS-1286937（60mg / kg，口服）也抑制肿瘤在HCT116异种移植模型上的生长[1]。NMS-P937（45mg / kg，i.v或60mg / kg，p.o）在携带HCT116的小鼠中抑制肿瘤生长至相当程度（分别为TGI，83％和79％静脉内和口服）。在播散性白血病模型中，NMS-P937（120mg / kg给予4个周期，连续2天，休息10天）和阿糖胞苷（75mg / kg，4个周期，连续5天，休息7天）的组合 AmL-PS耐受性良好，清楚显示小鼠存活率增加[2]。与标准疗法相比，NMS-P937（每天60mg / kg bid，每天2天，休息5天）显示出良好的疗效，在确定的疾病情况下中位生存时间（MST）显着增加[3]。

我们已经了解了NMS-1286937的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
将细胞接种到96孔或384孔板中，密度为10,000至30,000 / cm 2，粘附性为100,000 / mL，非粘附细胞为100,000 / mL，在适当培养基中添加10％胎牛血清。24小时后，用连续稀释的NMS-P937一式两份处理细胞，72小时后，通过CellTiter-Glo测定评估活细胞数。用S形拟合算法计算IC 50值。实验至少独立进行两次。

2）动物实验
对于癌异种移植研究，使用5-6周龄雌性Hsd，无胸腺nu / nu小鼠（平均体重，20-22g）。将HCT116，HT29，Colo205结肠直肠和A2780卵巢人癌细胞系皮下接种。携带可触及肿瘤（100-200mm 3）的小鼠在随机化后第二天开始按照剂量和时间表用载体或NMS-P937处理。用Vernier卡尺定期测量肿瘤尺寸，并计算肿瘤生长抑制（TGI）。基于体重减轻来评估毒性。对于白血病研究，使用5-6周龄雌性严重联合免疫缺陷小鼠（SCID;平均体重，20-22g）。皮下注射AmL细胞系HL-60（5×10 6个细胞），当肿瘤大小达到200至250mm 3时开始治疗。评估肿瘤尺寸和TGI。对于播散模型，静脉内注射5×106 AmL原代细胞（AmL-PS），并在2天后开始治疗。每天监测小鼠的疾病临床症状，并确定每组的中位存活时间。

3）激酶实验
使用反式磷酸化测定法测定推定的激酶抑制剂的抑制活性和所选化合物的效力。在优化的缓冲液和辅因子条件下，在存在用33P-γ-ATP追踪的ATP的情况下，特异性肽或蛋白质底物通过其特异性丝氨酸 - 苏氨酸或酪氨酸激酶进行反式磷酸化。在磷酸化反应结束时，通过添加过量的离子交换降低树脂捕获超过98％的未标记的ATP和放射性ATP; 然后树脂通过重力沉降到反应板的底部。随后取出含有磷酸化底物的上清液并转移到计数板中，然后通过b计数进行评估。所有测试激酶的抑制效力评估在25℃下使用60分钟终点测定进行，其中ATP和底物的浓度分别保持等于2×αKm和饱和（> 5×αKm）。

今天介绍了NMS-1286937的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，NMS-1286937是一种有效、高选择性、可口服的 PLK1 抑制剂，IC50 值为 2 nM。它的靶点活性是PLK1,2nM；PLK2,>10μM；PLK3,>10μM。

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参考文献：
[1]. Beria I, et al. NMS-P937, a 4,5-dihydro-1H-pyrazolo[4,3-h]quinazoline derivative as potent and selective Polo-like kinase 1 inhibitor. Bioorg Med Chem Lett. 2011 May 15;21(10):2969-74.
[2]. Valsasina B, et al. NMS-P937, an orally available, specific small-molecule polo-like kinase 1 inhibitor with antitumor activity in solid and hematologic malignancies. Mol Cancer Ther. 2012 Apr;11(4):1006-16.
[3]. Casolaro A, et al. The Polo-Like Kinase 1 (PLK1) inhibitor NMS-P937 is effective in a new model of disseminated primary CD56+ acute monoblastic leukaemia. PLoS One. 2013;8(3):e58424.