曲古柳菌素A-生物活性-作用-曲古柳菌素A靶点活性

曲古抑菌素A是从细菌属链霉菌属物种中分离的二烯羟肟酸的天然衍生物。曲古抑菌素A（TSA）可逆地且特异性地抑制组蛋白脱乙酰酶，导致调节染色质结构的核心组蛋白的超乙酰化。组蛋白乙酰化的增加促进了选择性基因转录和肿瘤生长的抑制。该试剂是培养物和荷瘤动物中各种转化细胞中肿瘤细胞生长停滞，分化和凋亡的有效诱导物。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍曲古抑菌素A的生物活性：

1）体外活性
曲古抑菌素A抑制八种乳腺癌细胞系的增殖，包括MCF-7，T-47D，ZR-75-1，BT-474，MDA-MB-231，MDA-MB-453，CAL 51和SK-BR- 3，平均IC50为124.4nM（范围，26.4-308.1nM），对ERα表达ERα的细胞系的效力高于ERα阴性细胞系。曲古抑菌素A在所有乳腺癌细胞系中类似地抑制HDAC活性，平均IC50为2.4nM（范围，0.6-2.6nM），并导致显着的组蛋白H4高度乙酰化。[1]与Trapoxin（TPX）和衣原体有效抑制HDAC1或HDAC4而非HDAC6不同，曲古抑菌素A抑制这些HDAC的程度相似，IC50分别为6 nM，38 nM和8.6 nM。[2]曲古抑菌素A（100 ng / mL）处理通过将p300和PCAF募集到结合的Sp1-NF-Y HDAC复合物中诱导MIA PaCa-2细胞中转化生长因子βII型受体（TβRII）的表达TβRII启动子的DNA元件，其与Sp1的伴随乙酰化和与复合物相关的HDAC总量的总体降低有关。[4]

2）体内活性
以0.5mg / kg施用曲古抑菌素A 4周在N-甲基-N-亚硝基脲致癌物诱导的大鼠乳腺癌模型中显示出有效的抗肿瘤活性，在剂量高达5mg / kg时没有任何可测量的毒性。[1]在非转基因和脊髓性肌萎缩（SMA）模型小鼠中单次腹膜内注射10mg / kg曲古抑菌素A导致乙酰化H3和H4组蛋白水平增加，并且存活运动神经元（SMN）基因表达适度增加。以10mg / kg /天施用曲古抑菌素A改善存活，减轻体重减轻，并增强SMA模型小鼠中的运动行为。[5]

我们已经了解了曲古抑菌素A的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
在存在或不存在HDAC抑制剂曲古抑菌素A的情况下，将细胞以每孔1×103个细胞和100μL完全DMEM在96孔板中培养72小时。通过使用CCK-8细胞增殖试剂盒进行WST-8测定来测量细胞毒性。用酶标仪测量450nm吸光度。所有实验一式三份进行，并进行3次独立实验[3]。

2）动物实验
大鼠[1]-将12只大鼠随机分组，通过皮下注射，在50μLDMSO或50μLDMSO作为载体对照中接受500μg/ kg曲古抑菌素A. 每周注射两次，持续4周。在随后的研究中，通过皮下注射，将30只大鼠随机化以在50μLDMSO或50μLDMSO作为载体对照中接受曲古菌素A500μg/ kg。每日注射4周。记录每只动物的每周肿瘤测量值，估计的肿瘤体积和体重。在4周研究期结束时处死动物; 切除可触及的肿瘤并立即在液氮中快速冷冻。肿瘤直径<2 cm或溃疡肿瘤的动物退出研究[1]。

3）激酶实验
从每种乳腺癌细胞系（MCF-7，T-47D，ZR-75-1，BT-474，MDA-MB-231，MDA-MB-453，CAL 51， 或SK-BR-3）。在0.1％（v / v）乙醇或0.1％（v / v）乙醇作为载体对照的不同浓度的曲古抑菌素A存在下，将20μL粗细胞提取物（~2.5×10 5个细胞）孵育60分钟。在25°C下加入1μL（~1.5×106 cpm）[3H]乙酰基标记的组蛋白H4肽底物（NH2-末端残基2-20），用[3H]乙酸，钠盐（3.7 GBq）乙酰化 / mmol）通过体外掺入方法。每个200μL反应用50μL1MHCl /0.16M乙酸猝灭，并用600μL乙酸乙酯萃取，并通过闪烁计数定量释放[3H]乙酸盐。使用非线性回归以图形方式确定IC 50值，以将抑制数据拟合至适当的剂量 - 反应曲线。

今天介绍了曲古抑菌素A的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，曲古抑菌素A(Trichostatin A)是有效的，特异的组蛋白去乙酰化酶类型 I 和 II (HDAC class I/II) 抑制剂，对 HDAC 的 IC50 值为 1.8 nM。它的靶点活性是HDAC,~1.8nM。

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参考文献：
1. Vigushin DM, et al. Clin Cancer Res, 2001, 7(4), 971-976.
2. Furumai R, et al. Proc Natl Acad Sci U S A, 2001, 98(1), 87-92.
3. Kim MS, et al. Cancer Res, 2003, 63(21), 7291-7300.
4. Huang W, et al. J Biol Chem, 2005, 280(11), 10047-10054.
5. Avila AM, et al. J Clin Invest, 2007, 117(3), 659-671.