[PCI-34051]-作用-生物活性-靶点活性

PCI-34051，中文名N-羟基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吲哚-6-甲酰胺，CAS号是950762-95-5。它是一种有效的选择性HDAC8抑制剂（IC50：10 nM）。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍PCI-34051的生物活性：

1）体外活性
PPCI-34051对HDAC8具有良好的效力（Ki：10nM）。与包括HDAC1的其他I类HDAC相比，PCI-34051对HDAC8具有高特异性（约5倍）。PCI-34051的选择性比HDAC1 / 6高200倍，选择性比HDAC2 / 3 // 10高1000倍。PCI-34051抑制卵巢肿瘤细胞系OVCAR-3（GI50：6μM）和15％细胞死亡。在用24小时或早期时间点用PCI-34051（<25μM）处理的敏感细胞系中均未观察到显着的微管蛋白和组蛋白乙酰化。PCI-34051诱导胱天蛋白酶依赖性细胞凋亡。当在用5μMPCI-34051处理后的不同时间测量胱天蛋白酶-3活性时，观察到12至24小时的活性水平增加。PCI-34051不会刺激Bid切割。虽然J.RT3-T.5和P116对PCI-34051敏感，但PLCγ1缺陷的J.gamma1系显示PCI-34051诱导的细胞凋亡程度显着降低。此外，稳态钙水平强烈影响PCI-34051诱导的细胞凋亡。PCI-34051诱导线粒体释放细胞色素c。

2）体内活性
PCI-34051和地塞米松的使用可减少哮喘患者的嗜酸性粒细胞炎症和气道高反应性，从而减少气道重塑[2]。

我们已经了解了PCI-34051的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
将肿瘤细胞系和人脐静脉内皮细胞培养至少两倍，并在化合物暴露结束时使用制造商推荐的Alamar Blue荧光测定细胞增殖测定监测生长。在96孔板中在一式三份孔中测定化合物（例如，PCI-34051）。使用四参数逻辑方程[1]通过非线性回归估计抑制细胞生长50％（GI50）和95％置信区间所需的浓度。

2）动物实验
小鼠[2]-使用哮喘的小鼠模型。简言之，使用年龄为6-8周且体重18-22g的健康雌性BALB / C小鼠（n = 72）。将动物独立地饲养在无病原体的房间中，并随意提供水和标准食物。在实验开始前将动物饲养1周。

将小鼠分为六个治疗组：正常对照，单纯性哮喘，地塞米松，Tubastatin A HCl，PCI-34051和Givinostat。使用卵清蛋白（OVA，20μg）和氢氧化铝凝胶（2mg）在第1天，第8天和第15天对最后五组中的小鼠进行致敏。最后一次致敏后7天，使用超声雾化装置进行OVA（20mg / mL）雾化（3mL / min，30分钟，3次/周，持续8周）。在激发前30分钟通过腹膜内注射施用地塞米松（2.0mg / kg），TSA（0.5mg / kg），PCI-34051（0.5mg / kg）和Givinostat（0.5mg / kg）。在正常对照组中，使用生理盐水代替OVA。

3）激酶实验
使用连续胰蛋白酶偶联测定法测量组蛋白脱乙酰酶活性。对于抑制剂表征，使用荧光板读数器中的96孔测定板在100μL-1的反应体积中进行测量。对于每种同工酶，将反应缓冲液（50mM HEPES，100mM KCl，0.001％Tween-20,5％DMSO，pH7.4，补充有浓度为0-0.05％的牛血清白蛋白）中的HDAC蛋白与抑制剂混合。各种浓度并孵育15分钟。加入胰蛋白酶至终浓度为50nM，加入乙酰基-Gly-Ala-（N-乙酰基-Lys） - 氨基-4-甲基香豆素至终浓度为25-100μM以引发反应。在30分钟滞后时间后，使用355nm的激发波长和460nm的检测波长在30分钟的时间范围内测量荧光。荧光随时间的增加用作反应速率的量度。使用程序BatchKi [1]获得抑制常数Ki（app）。

今天介绍了PCI-34051的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，PCI-34051是一种有效的选择性的 HDAC8 抑制剂，IC50 为 10 nM。它的靶点活性是HDAC1,4μM；HDAC10,13μM；HDAC2,>50μM；HDAC6,2.9μM；HDAC8,10nM。

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参考文献：
[1]. Balasubramanian S, et al. A novel histone deacetylase 8 (HDAC8)-specific inhibitor PCI-34051 induces apoptosis in T-cell lymphomas. Leukemia. 2008 May;22(5):1026-34.
[2]. Ren Y, et al. Therapeutic effects of histone deacetylase inhibitors in a murine asthma model. Inflamm Res. 2016 Dec;65(12):995-1008.