马西替坦-作用-生物活性-马西替坦靶点活性

马西替坦，英文名马西替坦，它是一种口服生物可利用的组蛋白去乙酰化酶（HDACs）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍马西替坦的生物活性：

1）体外活性
马西替坦可激活Caspases 3，8 和9。马西替坦与Melphalan 和Proteasome inhibitors bortezomib 及S-2209有协同作用。盐酸马西替坦（马西替坦 [HCl]，5μM）诱导骨髓瘤细胞中的组蛋白乙酰化。盐酸马西替坦显示底物竞争性结合模式，平均Ki值为27nM。盐酸马西替坦（5μM）诱导骨髓瘤细胞中的组蛋白高度乙酰化。马西替坦抑制细胞生长，诱导细胞凋亡并抑制MM细胞增殖。

马西替坦（5μM）还调节bcl-2家族蛋白的表达并抑制Akt下游的Akt途径信号传导。当与常见和新的抗骨髓瘤药物联合使用时，马西替坦对骨髓瘤细胞发挥协同作用[1]。马西替坦抑制头颈部鳞状细胞癌细胞系中的细胞生长，IC50范围为0.775μM至1.572μM（SCC25的IC50：0.775μM; CAL27：1.572μM;和FaDu：0.899μM）。

马西替坦（1.25和2.5μM）对HNSCC细胞系的照射具有协同作用。马西替坦与顺铂联合诱导survivin的下调。然而，马西替坦对Mcl-1和p-AKT表达没有影响[2]。马西替坦通过共同治疗AZD-2014降低HCC细胞的活力，IC50范围为0.89±0.12μM至0.07±0.01μM[3]。

1 μM 马西替坦抑制MM细胞系（OPM-2，NCI-H929，U266）细胞增殖和诱导细胞周期的G0/G1期阻滞，同时伴随着cyclin D1，CDC25A，CDK4和Rb的水平降低以及p21基因的上调。马西替坦通过降低4E-BP1和p70S6K的磷酸化来干扰Akt信号通路。马西替坦使Bim和Bax蛋白表达水平升高，Bcl-xL的水平降低。

2）体内活性
马西替坦显示出良好的PK曲线，具有高生物利用度和低pT变异性。口服马西替坦的表观t 1/2范围为2.7至4.4小时。一天一次口服600 mg 马西替坦，在14天的周期内持续1-5天耐受性良好。

我们已经了解了马西替坦的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的两种方法：

1）细胞实验
CCK-8细胞增殖试验用于研究瑞米司他对HNSCC细胞的抗增殖作用。将细胞以3×105 /孔的密度接种到96孔板中。生长24小时后，用瑞米司他和顺铂单独或组合处理细胞，并孵育72小时。未处理的细胞保持在RPMI中，等浓度的二甲基亚砜作为对照。72小时后，通过CCK-8测量细胞增殖。实验一式三份进行[2]。

2）激酶实验
40微升酶缓冲液（15 mM Tris HCl pH 8.1,0.25 mM EDTA，250 mM NaCl，10％v：v甘油）含有HDAC1,3,6或8活性，29μL酶缓冲液和1μL瑞米司他[HCl]不同将浓度加入到96孔微量滴定板中，通过加入30μL底物肽Ac-NH-GGK（Ac）-AMC开始反应（HDAC1,3和6测定，HDAC1的最终浓度为6μM，10μM用于HDAC1 HDAC6和25μM用于HDAC3 / DAD）或Ac-RHK（Ac）K（Ac）-AMC（HDAC8测定，终浓度50μM）。

在30℃温育180分钟（HDAC1，HDAC6，HDAC8）或120分钟（HDAC3）后，通过加入25μL终止溶液（50mM Tris HCl pH 8,100mM NaCl，0.5mg / d）终止反应。mL胰蛋白酶和2μM曲古抑菌素A [TSA]）。在室温下再孵育40分钟后，使用Wallac Victor2 1420多标记计数器（消光355nm，发射460nm）测量荧光，以定量通过脱乙酰化肽的胰蛋白酶切割产生的AMC。为了计算50％抑制浓度（IC50）值，将没有测试化合物（1％DMSO，阴性对照）的孔中的荧光设定为100％酶活性，并且设置具有2μMTSA（阳性对照）的孔中的荧光。在0％酶活性（背景荧光减去）[1]。

今天介绍了马西替坦的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，马西替坦马西替坦是一种有效的HDAC1，HHDAC3 和 HDAC6 抑制剂，IC50 值分别为 42.5，50.1，71.8 nM，同时对 HDAC8 有较弱的抑制作用，IC50 值为 877 nM。它的靶点活性是HDAC1,42.5nM；HDAC3,50.1nM；HDAC6,71.8nM。

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参考文献：
[1]. Mandl-Weber S, et al. The novel inhibitor of histone deacetylase resminostat (RAS2410) inhibits proliferation and induces apoptosis in multiple myeloma (MM) cells. Br J Haematol. 2010 May;149(4):518-28.
[2]. Enzenhofer E, et al. Effect of the histone deacetylase inhibitor resminostat on head and neck squamous cell carcinoma cell lines. Head Neck. 2017 May;39(5):900-907.
[3]. Peng X, et al. mTOR inhibition sensitizes human hepatocellular carcinoma cells to resminostat. Biochem Biophys Res Commun. 2016 Sep 2;477(4):556-562.