他喹莫德-作用-生物活性-他喹莫德靶点活性

他喹莫德，英文名Tasquinimod，它是一种喹啉-3-甲酰胺亚胺类似物，具有抗血管生成和潜在的抗肿瘤活性。他喹莫德已被证明可降低血管密度，但确切的作用机制尚不清楚。该试剂还显示出在涉及人前列腺癌异种移植物的前列腺癌的鼠模型中增强多西紫杉醇和雄激素消融的抗肿瘤作用。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍他喹莫德的生物活性：

1）体外活性
他喹莫德抑制缺氧诱导的组蛋白乙酰化降低而不降低HDAC表达或直接抑制HDAC活性。他喹莫德在HDAC4的调节性锌结构域内以10-30 nM的Kd变构结合，这导致抑制N-CoR / HDAC3的共定位，从而抑制组蛋白和HDAC4客户转录因子（例如HIF-1α）的脱乙酰化。

当骨髓来源的抑制细胞分化时，TAM分泌血管生成因子如VEGF，FGF，TNF-α和TGF-β。他喹莫德可抑制肿瘤血管生成，因为抑制S100A9 / TLR4依赖性MDSCs肿瘤浸润和/或抑制HDS4 / N-CoR / HDAC3依赖的HIF-1α脱乙酰化，MDSCs抑制其分化为TAMs [1]。他喹莫德是一种口服活性喹啉-3-甲酰胺，与癌症中的HDAC4和S100A9具有高亲和力，在受损的肿瘤微环境中浸润宿主细胞，抑制血管生成反应所需的适应性生存途径[2]。

在10μM他喹莫德时，TSP1 mRNA表达在6小时时升高并在72小时后达到峰值。此外，暴露72小时后，TSP1 mRNA水平在1μM他喹莫德的剂量下已经升高，表明他喹莫德诱导的TSP1 mRNA表达的变化在剂量范围内发生。在较高剂量水平（即50-100μM）下，mRNA水平在72小时下降，表明在这些浓度下具有额外的药物作用。

他喹莫德对LNCaP细胞中TSP1 mRNA的上调表现为TSP1蛋白的表达增加，如通过培养24小时和72小时的细胞制备的细胞裂解物的蛋白质印迹分析所示。随着细胞内TSP1蛋白水平的增加，细胞外TSP1在检测到的细胞培养基中的积累也是统计学上显着的（p <0.05）。TSP1的细胞外分泌是时间依赖性的，并且在10μM暴露于他喹莫德 24小时后可以清楚地检测到。此外，TSP1 mRNA水平由他喹莫德在激素不敏感细胞系LNCaP19中以10μM诱导，但在DU145细胞中不诱导[3]。

2）体内活性
当通过管饲法或饮用水给予成年雄性小鼠（即C57B1 / 6J或无胸腺裸鼠）0.1-30mg / kg（即0.2-74μmoles/ kg）时，他喹莫德的生物利用度和口服吸收是极好的。他喹莫德的效力表示为抑制癌症生长50％的他喹莫德每日口服剂量范围为0.1-1.0 mg / kg / d（即0.24-2.40μmoles/ kg /天），相对于一系列（n> 5）免疫缺陷小鼠中的人前列腺癌异种移植物。

通过饮用水以5mg / kg /天的慢性剂量服用的他喹莫德在免疫活性同系小鼠中产生> 80％的TRAMP-C2小鼠前列腺癌生长抑制（p <0.05）[2]。携带皮下LNCaP肿瘤的裸鼠用他喹莫德治疗3周。接种后第7天开始以1mg / kg /天和10mg / kg /天接触他喹莫德。与接种后28天的未处理对照组相比，1 mg / kg /天和10 mg / kg /天的肿瘤重量均有统计学显着的剂量依赖性降低（p <0.001），说明他喹莫德的抗肿瘤作用[3]。

我们已经了解了他喹莫德的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的两种方法：

1）细胞实验
两种人前列腺癌细胞系，CWR-22RH和LNCaP（ATCC）都是雄激素非依赖性的，但仍然对雄激素刺激生长敏感，表达PSA和突变的雄激素受体。在体外暴露于他喹莫德（0.1-100μM）后，还测试了激素非依赖性细胞系LNCaP19和DU145的TSP1诱导。CWR-22RH，LNCaP和DU145在含有10％FCS和L-谷氨酰胺混合物的RPMI培养基1640中生长，而LNCAP19在含有10％无激素（RDCC）FCS的RPMI培养基中培养[3]。

2）动物实验
小鼠[3]-裸鼠BALB / c小鼠用于皮下植入人前列腺肿瘤细胞LNCaP和CWR-22RH。在整个实验中每周两次用微量测量器测量肿瘤生长，并且在实验终止的当天通过重量测量最终肿瘤负荷。在接种后第7天开始以1mg / kg /天和10mg / kg /天（通过饮用水口服给药）的他喹莫德分布。

今天介绍了他喹莫德的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，他喹莫德Tasquinimod是一种口服抗血管生成剂，临床试验用于治疗去势抵抗性前列腺癌的。他喹莫德与 HDAC4 Zn2+ 结合结构域结合的Kd 值为10-30 nM。它的靶点活性是HDAC4。

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参考文献：
[1]. Isaacs JT, et al. Tasquinimod Is an Allosteric Modulator of HDAC4 survival signaling within the compromised cancer microenvironment. Cancer Res. 2013 Feb 15;73(4):1386-99.
[2]. Isaacs JT, et al. Anti-cancer potency of tasquinimod is enhanced via albumin-binding facilitating increased uptake in the tumor microenvironment. Oncotarget. 2014 Sep 30;5(18):8093-106.
[3]. Olsson A, et al. Tasquinimod (ABR-215050), a quinoline-3-carboxamide anti-angiogenic agent, modulates the expression of thrombospondin-1 in human prostate tumors. Mol Cancer. 2010 May 17;9:107.