PJ34盐酸盐-作用-生物活性-靶点活性

PJ34盐酸盐，英文名PJ34 hydrochloride，它是 PARPl1/2 的抑制剂，IC50 值分别为 110 nM 和 86 nM。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍PJ34盐酸盐的生物活性：

1）体外活性
PJ34抑制PARP酶活性，IC50为110±1.9nM。为了比较其他PARP抑制剂在PC12细胞中的神经保护特性，使用LDH测定法评估PJ34。PJ34治疗也显着且浓度依赖性地减弱细胞死亡，浓度范围为10-7至10-5M [1]。

2）体内活性
为了比较其他PARP抑制剂的效力和功效，分别以3.2和10mg / kg的剂量评估PJ34。剂量为3.2 mg / kg的PJ34显着降低皮质损伤33％; 然而，10毫克/千克剂量给药显示出相反的效果（减少17％）[1]。PJ34（25mg / kg）使缺血动物中TNF-αmRNA的水平降低70％，并且处理小鼠中的这些值与假动物或幼稚动物的这些值没有差异。与载体治疗的缺血小鼠相比，用PJ34治疗缺血小鼠的E-选择素mRNA水平降低了81％，ICAM-1 mRNA水平降低了54％[2]。

我们已经了解了PJ34盐酸盐的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）动物实验
大鼠[1]-对于短暂性局灶性缺血，使用9至10周龄雄性Wistar大鼠（体重274-380g）。用0.5％甲基纤维素悬浮的FR247304，PJ34或3-AB以10和32mg / kg的剂量给予FR247304,3和10mg / kg用于PJ34，或32和100mg / kg用于3- AB在MCA闭塞前10分钟和再循环前10分钟腹膜内注射两次。给药体积调节至2mL / kg。

小鼠[2]-使用雄性瑞士白化小鼠（27-32g）。将PARP抑制剂PJ34（1.25,12.5或25 mg / kg）溶于等渗盐水（NaCl，0.9％）中，腹腔注射，体积为10 mL / kg，缺血前15 min，再次发病后4 h 缺血 给予对照缺血小鼠和假动物载体（盐水）。幼稚动物也包括在研究中。

2）激酶实验
为了评估FR247304,3-AB和PJ34的PARP-1或PARP-2抑制活性，评估PARP活性，稍作修改。PARP酶测定在100μL的终体积中进行，包括50mM Tris-HCl（pH 8.0），25mM MgCl 2,1mM二硫苏糖醇，10μg活化鲑精DNA，0.1μCi[腺苷酸-32P] NAD， 用于PARP-1测定的0.2单位重组人PARP或用于PARP-2测定的0.1单位重组小鼠PARP-2，以及各种浓度的FR261529或3-AB。将反应混合物在室温（23℃）下温育15分钟，并通过加入200μL冰冷的20％三氯乙酸（TCA）终止反应，并在4℃下孵育10分钟。将沉淀物转移到GF / B过滤器上，用10％TCA溶液和70％乙醇洗涤三次。在过滤器干燥后，通过液体闪烁计数测定放射性。

3）细胞实验
培养的PC12细胞在补充有5％（v / v）胎牛血清，5％（v / v）马血清和1％（v / v）青霉素 - 链霉素抗生素混合物的Dulbecco改良Eagle培养基中生长。细胞在95％空气和5％CO 2的气氛中于37℃生长。对于所有实验，将细胞以4×10 4个细胞/孔的密度接种在96孔培养板中并使其附着过夜。为了评估细胞活力，通过使用LDH测定试剂盒的LDH释放的标准测量来量化过氧化氢诱导的细胞毒性。简言之，在暴露于过氧化氢后6小时，收集每孔的20μL培养基，并加入由LDH测定试剂盒制备的溶液。在室温下孵育30分钟后，通过加入1N HCl终止反应，并使用酶标仪在450nm下测量吸光度。

今天介绍了PJ34盐酸盐的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，PJ34盐酸盐（PJ34 hydrochloride）是 PARPl1/2 的抑制剂，IC50 值分别为 110 nM 和 86 nM。它的靶点活性是PARP,20nM(EC50)。

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参考文献：
[1]. Iwashita A, et al. A novel and potent poly(ADP-ribose) polymerase-1 inhibitor, FR247304 (5-chloro-2-[3-(4-phenyl-3,6-dihydro-1(2H)-pyridinyl)propyl]-4(3H)-quinazolinone), attenuates neuronal damage in in vitro and in vivo models of cerebral ischemia. J Ph
[2]. Haddad M, et al. Anti-inflammatory effects of PJ34, a poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor, in transient focal cerebral ischemia in mice. Br J Pharmacol. 2006 Sep;149(1):23-30.
[3]. Diani-Moore S, et al. NAD+ loss, a new player in AhR biology: prevention of thymus atrophy and hepatosteatosis by NAD+ repletion. Sci Rep. 2017 May 23;7(1):2268.