叶酸的鉴别和检查

鉴别
取本品细粉适量（约相当于叶酸0.4mg),加0.4%氢氧化钠溶液20ml，振摇使叶酸溶解，滤过；取滤液10ml,照叶酸项下的鉴别（1)项试验，显相同的反应。
取上述剩余的滤液，加等量的0.4% 氢氧化钠溶液稀释后，照叶酸项下的鉴别（2)项试验，显相同的结果。
检査
有关物质 避光操作。取本品细粉适量（约相当于叶酸lOmg)，置具塞试管中，加人0.5% 氨溶液10ml,置热水浴中加热20分钟，时时振摇使叶酸溶解，离心（每分钟4000转）15分钟，取上清液作为供试品溶液。精密量取lml ,置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液，照叶酸有关物质项下的色谱条件测定。供试品溶液的色谱图中，蝶酸峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.6 倍（0.6% ) , 单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（1.0% ) ，除蝶酸峰外各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积的3倍（3.0% ) 。供试品溶液色谱图中小于对照溶液主峰面积0.05倍的峰忽略不计。
含量均匀度 （1)取本品1片（5mg规格），照含量测定项下的方法，自“置25ml量瓶中”起，依法测定，计算含量，应符合规定(通则0941)。(2)取本品1片（0.4mg规格），置10ml量瓶中，加0.5%氨溶液约5ml，置热水浴中加热20分钟，时时振摇使叶酸溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取叶酸对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.5%氨溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml,置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照叶酸含量测定项下色谱条件，精密量取供试品溶液与对照品溶液各10u1，分别注入液相色谱仪，依法测定，计算含量，应符合规定(通则 0941)。
溶出度 （1)取本品（5mg规格），照溶出度与释放度测定法(通则0931第一法），以磷酸盐缓冲液（pH 6.8 )900ml为溶出介质，转速为每分钟100转，依法操作，经45分钟时，取溶液，滤过，取续滤液照紫外-可见分光光度法（通则0401),在281mn的波长处测定吸光度；另取叶酸对照品，精密称定，加上述溶出介质溶解并定量稀释制成每lm l中约含Sfig的溶液，同法测定，计算出每片的溶出量。限度为标示量的70%,应符合规定。(2)取本品（0.4mg规格），照溶出度与释放度测定法(通则0931第三法），以磷酸盐缓冲液（pH6.8)100ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml,滤过，取续滤液照紫外-可见分光光度法（通则0401),在281nm的波长处测定吸光度；另取叶酸对照品，精密称定，加上述溶出介质溶解并定量稀释制成每lml中约含4ug的溶液，同法测定，计算出每片的溶出量。限度为标示量的75%，应符合规定。
其他 应符合片剂项下有关的各项规定（通则0101)。
含量测定
避光操作。（1)取本品（5mg规格）20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于叶酸5mg),置25ml量瓶中，加0.5%氨溶液约15ml，置热水浴中加热20分钟，时时振摇使叶酸溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照叶酸含量测定项下的方法测定，即得。
(2)取本品（0.4mg规格）50片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于叶酸4mg),置100ml量瓶中，加0.5%氨溶液约15ml,置热水浴中加热20分钟，时时振摇使叶酸溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照叶酸含量测定项下的色谱条件，精密量取10u1注人液相色谱仪，记录色谱图；另取叶酸对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加0.5 % 氨溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml,置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。