ML355的生物活性测试结果是什么？

ML355（CAS号：1532593-30-8）是一种小分子抑制剂，主要针对17-羟基二十碳二烯酸（17-HDHA）的合成酶活性。该化合物在化学结构上属于苯并咪唑类衍生物，具有良好的生物相容性和选择性。在炎症和免疫相关研究领域，ML355 被广泛用于调控脂质介质的生物合成，特别是那些参与中性粒细胞（neutrophils）迁移和炎症级联反应的代谢物。17-HDHA 是专一性促炎脂质介质（specialized pro-resolving mediators, SPMs）的上游产物，由15-脂氧合酶（15-LOX）催化生成，因此 ML355 通过抑制这一途径发挥作用。

从化学专业角度来看，ML355 的设计基于高通量筛选和结构优化，分子量约为 378.45 g/mol，溶解度在 DMSO 中较高（>50 mg/mL），便于体外实验应用。其 IC50 值针对 15-LOX 在微摩尔级别，显示出高效抑制潜力。这使得它成为研究炎症分辨（resolution of inflammation）机制的理想工具。

生物活性测试背景

生物活性测试通常旨在评估 ML355 在细胞和动物模型中的药理学效应，特别是针对 17-HDHA 介导的炎症响应。测试设计遵循标准药理学协议，包括体外细胞实验、酶抑制测定和体内动物模型。关键指标包括抑制效率、细胞毒性、炎症标志物水平（如细胞因子释放和白细胞募集）以及潜在的脱靶效应。

测试中，ML355 的浓度梯度通常从 0.1 μM 到 10 μM，结合阳性对照（如 baicalein，一种已知 15-LOX 抑制剂）和阴性对照（DMSO 溶剂）。实验平台多采用 HEK293 或 RAW264.7 细胞系，以模拟巨噬细胞或上皮细胞的炎症环境。此外，体内测试常使用小鼠急性肺损伤（ALI）模型或关节炎模型，通过尾静脉注射或口服给药评估疗效。

体外测试结果

在体外酶抑制实验中，ML355 对重组人 15-LOX-1 的抑制活性高度显著。使用荧光基底法（Amplex Red 试剂盒）测定，ML355 的 IC50 值约为 0.3 μM，表明其在低浓度下即可有效阻断花生四烯酸（arachidonic acid）向 17-HDHA 的转化。相比之下，非特异性 LOX 抑制剂的 IC50 往往高于 5 μM，这突显了 ML355 的选择性。

细胞水平测试进一步证实了其生物活性。在 LPS（脂多糖）刺激的 RAW264.7 巨噬细胞中，ML355（1 μM）处理后，17-HDHA 产生量下降约 70%，伴随 TNF-α 和 IL-6 等促炎细胞因子分泌减少 50%以上。同时，MTT 细胞活力测定显示，在 10 μM 浓度下，细胞存活率仍超过 90%，无明显细胞毒性。这表明 ML355 的抑制作用是功能性的，而非通过细胞死亡实现。

另一项关键体外测试涉及中性粒细胞迁移实验。使用 Boyden 室模型，在 fMLP（N-甲酰基甲硫氨酰亮氨酰苯丙氨酰肽）诱导下，ML355 预处理（0.5 μM，30 分钟）显著降低了中性粒细胞向 17-HDHA 梯度的趋化响应，迁移率从对照组的 65% 降至 25%。这一结果支持 ML355 通过阻断 17-HDHA 信号通路，抑制炎症细胞募集的机制。

体内测试结果

体内生物活性测试主要在 C57BL/6 小鼠模型中进行。以急性肺损伤（ALI）模型为例，通过鼻内滴注 LPS 诱导炎症后，静脉注射 ML355（10 mg/kg）。24 小时后，支气管肺泡灌洗液（BALF）中 17-HDHA 水平降低 60%，中性粒细胞浸润减少 55%（经流式细胞术检测 CD11b+ Ly6G+ 细胞）。炎症评分（组织学分析）显示，肺泡渗出和间质炎症显著缓解，肺损伤指数从 3.2 分降至 1.5 分。

在类风湿关节炎（CIA）模型中，ML355 口服给药（20 mg/kg，每日一次，持续 14 天）后，关节肿胀体积减少 40%，血清中 17-HDHA 和 PGE2（前列腺素 E2）浓度分别下降 50% 和 35%。行为学评估（如爪部抓握力）改善，提示 ML355 可能缓解关节炎相关疼痛和功能障碍。药代动力学数据显示，ML355 的半衰期约为 4 小时，生物利用度 >30%，肝肾毒性测试（ALT/AST 和 BUN/Cr 水平）无显著变化。

值得注意的是，一项针对人类原代中性粒细胞的 ex vivo 测试（从健康捐献者分离）显示，ML355（1 μM）同样抑制了 PMA（佛波酯）诱导的 17-HDHA 产生，效果与小鼠模型一致。这为 ML355 的潜在临床转化提供了依据。

机制解析与潜在应用

ML355 的生物活性主要源于其对 15-LOX 的竞争性抑制，阻断脂质过氧化途径，从而减少 17-HDHA 介导的 G 蛋白偶联受体（GPR）信号激活，导致下游 PKC 和 MAPK 通路抑制，最终降低 NF-κB 转录活性。这一机制在炎症分辨中的作用尤为重要，因为 17-HDHA 促进中性粒细胞存活和迁移，而非简单抑制炎症。

从化学优化视角，ML355 的结构可进一步修饰以提高口服生物利用度，如引入亲水基团。当前测试结果表明，其在慢性炎症疾病（如哮喘、COPD 和 IBD）中的应用前景广阔，但需注意潜在的 LOX 家族交叉抑制，可能影响其他 SPMs 的平衡。

总结与注意事项

综上，ML355 的生物活性测试结果一致显示其高效、安全地抑制 17-HDHA 相关炎症响应，体外 IC50 低至 0.3 μM，体内疗效显著减少细胞因子和白细胞浸润。这些数据为炎症机制研究提供了可靠工具。实验操作时，建议使用 HPLC-MS 验证代谢物水平，并结合 RNA-seq 分析下游基因表达。未来研究可探索其与现有 NSAID 的联合应用，以增强抗炎效果。