尼罗替尼的作用和实验方法

尼罗替尼是具有抗肿瘤活性的口服生物可利用的氨基嘧啶衍生物Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂。 设计用于克服伊马替尼耐药性，尼罗替尼结合并稳定Bcr-Abl融合蛋白的Abl蛋白的激酶结构域的无活性构象，从而抑制Bcr-Abl介导的费城染色体阳性（Ph +）增殖。 慢性粒细胞白血病（CML）细胞。 该试剂还抑制受体酪氨酸激酶血小板衍生生长因子受体（PDGF-R）和c-kit，一种在大多数胃肠道间质瘤（GIST）中突变和组成型激活的受体酪氨酸激酶。

一、尼罗替尼的生物活性详解：
1）体外活性
新型选择性Abl抑制剂尼罗替尼（AMN107）设计用于与BCR-ABL的ATP结合位点相互作用，其亲和力高于伊马替尼。 除了与伊马替尼相比显着更有效（IC50 <30 nM）外，尼罗替尼还能维持对大多数赋予伊马替尼耐药性的BCR-ABL点突变体的活性[1]。 尼罗替尼显示出对抗GIST异种移植物系和伊马替尼抗性GIST细胞系的显着抗肿瘤效力。 亲本细胞系GK1C和GK3C显示伊马替尼敏感性，IC50分别为4.59±0.97μM和11.15±1.48μM。 伊马替尼耐药细胞系GK1C-IR和GK3C-IR显示伊马替尼耐药，IC50值分别为11.74±0.17μM（P <0.001）和41.37±1.07μM（P <0.001）[2]。

2）体内活性
在GK1X异种移植物系（n.s。）中，伊马替尼的肿瘤生长抑制百分比（TGI）为83.8％，尼罗替尼为69.6％。 在GK2X异种移植物系中，伊马替尼的TGI为83.0％，尼罗替尼为85.3％（n.s.）。 此外，伊马替尼的GK3X异种移植物线TGI为31.1％，尼罗替尼（n.s.）为47.5％。 这些结果表明，除了GK1X异种移植物系外，尼罗替尼显示出与伊马替尼相当或更高的抗肿瘤作用[2]。 尼罗替尼对宏观和微观病理评分具有显着的治愈作用，并确保吲哚美辛诱导的小肠结肠炎大鼠模型中相当大的粘膜愈合。 虽然尼罗替尼降低了结肠中PDGFRα和β水平以及凋亡评分，但它对体重和TNF-α水平没有显着影响。 进一步的实验研究可以为人类提供更明确的证据[3]。

二、尼罗替尼的实验方法：
1）动物实验
小鼠[2]-使用裸鼠中的GIST异种移植物系GK1X，GK2X和GK3X。通过在BALB / cSLc-nu / nu小鼠中连续传代来维持这些异种移植物系。每天用载体或40mg / kg伊马替尼或尼罗替尼治疗携带GK1X，GK2X和GK3X肿瘤（每组6-8只小鼠）的小鼠，持续4周。根据公式LW2 / 2，根据肿瘤长度（L）和宽度（w）的厚度测量来确定肿瘤体积（TV）。电视每两到三天以及评估当天确定。处死小鼠并且如下计算肿瘤生长抑制（TGI）的百分比：TGI（％）= [1-（评估日的治疗组肿瘤体积 - 治疗组肿瘤体积在第1天的平均值）/（平均值）对照组肿瘤体积对第1天对照组肿瘤体积的评价日均值]]×100。

大鼠[3]-雌性Wistar白化大鼠，体重226-243g（平均体重，241.09g），用于本研究。以吲哚美辛给药的同一天开始，通过口胃管向尼罗替尼组大鼠（n = 7）施用尼罗替尼，以两个分剂量施用20mg / kg / d，持续13天。在13-d期结束时，在乙醚麻醉下从所有大鼠获得用于病理学检查的血液和组织样品。然后通过断头处死所有动物。

2）细胞实验
将人原代施万细胞和神经鞘瘤细胞接种在预涂96孔板上。 在用100ng / mL PDGF-DD刺激前40分钟加入尼罗替尼，并将细胞培养72小时（3天）。 由于尼罗替尼的半衰期为18小时，因此每天新添加一半原始添加浓度。 除了DAPI染色和总细胞数的确定之外，更灵敏和准确的BrdU掺入方法用于检测增殖细胞。 使用倒置荧光显微镜和200倍放大率盲计数总细胞量（DAPI）和分裂细胞数（BrdU阳性）。 计算每个孔中的所有细胞。 不同细胞批次之间每孔的细胞总数不同，为100-300个细胞/孔。

综上所述：尼罗替尼是一种二代酪氨酸激酶 (TKI) 抑制剂，作用于 BCR-ABL比 Imatinib 有效，且有效作用于多种抗 Imatinib 的 BCR-ABL 突变型。它的靶点活性为Bcr-Abl,<30nM。

参考文献：
[1]. Weisberg E, et al. Beneficial effects of combining nilotinib and imatinib in preclinical models of BCR-ABL+ leukemias. Blood. 2007 Mar 1;109(5):2112-20.
[2]. Sako H, et al. Antitumor effect of the tyrosine kinase inhibitor Nilotinib on gastrointestinal stromal tumor (GIST) and Imatinib-resistant GIST cells. PLoS One. 2014 Sep 15;9(9):e107613.
[3]. Dervis Hakim G, et al. Mucosal healing effect of nilotinib in indomethacin-induced enterocolitis: A rat model. World J Gastroenterol. 2015 Nov 28;21(44):12576-85.
[4]. Fujita KI, et al. Involvement of the Transporters P-Glycoprotein and Breast Cancer Resistance Protein in Dermal Distribution of the Multikinase Inhibitor Regorafenib and Its Active Metabolites. J Pharm Sci. 2017 Sep;106(9):2632-2641.
[5]. Meirson T, et al. Targeting invadopodia-mediated breast cancer metastasis by using ABL kinase inhibitors. Oncotarget. 2018 Apr 24;9(31):22158-22183.