S-鲁索替尼(INCB018424)的生物活性和实验方法

S-鲁索替尼(INCB018424)是第一个进入临床的高活性JAK1和2选择性抑制剂，IC50分别为3.3 nM和2.8 nM，比对JAK3的抑制性高130倍以上。

一、S-鲁索替尼的生物活性：
1）体外活性
INCB018424在Ba/F3细胞中以剂量依赖性方式显著增加细胞凋亡。INCB018424作用于Ba/F3细胞和HEL细胞，有效且选择性抑制JAK2V617F介导的信号和增殖。INCB018424(64 nM) 导致Ba/F3细胞线粒体去极化增加一倍。INCB018424抑制正常供体和真性红细胞增多症患者提供的红系祖细胞增殖，IC50分别为407 nM 和 223 nM。INCB018424表现出对红系细胞集落形成的有效作用，IC50为67 nM。

2）体内活性
INCB018424（180 mg/kg，口服，每天两次）显著减少JAK2V617F驱动的小鼠模型中脾肿大和炎性细胞因子的循环水平，并优先消灭肿瘤细胞，显著延长生存期，且未产生骨髓抑制或免疫抑制。上述小鼠在第22天存活率超过90％。15 mg Ruxolitinib处理骨髓纤维化患者，每天两次，在48周时，28％患者的脾脏体积减少至少35％。Ruxolitinib组的患者整体生活质量改善，与骨髓纤维化有关的症状减轻。kg为121％）。 对于50和100mg / kg /天组，分别在3/10和8/8小鼠中观察到完全消退。

二、S-鲁索替尼的实验方法：
1）细胞实验
Ba / F3和HEL细胞浓度：3μM方法：将细胞以2×103 /孔的白底96孔板接种，用来自DMSO原液的INCB018424处理（0.2％最终DMSO浓度），并在37℃温育48小时。 在含有5％CO2的气氛中。 通过使用Cell-Titer Glo荧光素酶试剂或活细胞计数的细胞ATP测定来测量活力。 将值转化为相对于载体对照的抑制百分比，并使用PRISM GraphPad根据数据的非线性回归分析拟合IC 50曲线。

2）动物实验
动物模型：JAK2V617F驱动的小鼠模型配方和剂量：5％二甲基乙酰胺，0.5％甲基纤维素。 180 mg / kg给药：口服强饲。

3）激酶实验
用亲和层析纯化用Sf21细胞和杆状病毒载体表达的重组蛋白。 通过具有肽底物（-EQEDEPEGDYFEWLE）的均相时间分辨荧光测定进行JAK激酶测定。 每种酶反应用Ruxolitinib或对照，JAK酶，500nM肽，三磷酸腺苷（ATP; 1mM）和2％二甲基亚砜（DMSO）进行1小时。 IC50是抑制50％荧光信号所需的INCB018424浓度。

综上所述，S-鲁索替尼是第一种有效的选择性JAK1 / 2抑制剂。它的靶点活性为Chk2,>1μM；JAK1,3.3nM；JAK2,2.8nM；JAK3,428nM；Tyk2,19nM。

参考文献：
1. Quintas-Cardama A, et al. Blood, 2010, 115(15), 3109-3117.
2. Verstovsek S, et al. N Engl J Med, 2012, 366(9), 799-807.
3. Harrison C, et al. N Engl J Med, 2012, 366(9), 787-798.