白藜芦醇的生物活性_白藜芦醇的实验方法

白藜芦醇是一种多酚植物抗毒素，具有抗氧化和潜在的化学预防活性。

一、白藜芦醇的生物活性详解：
1）体外活性
白藜芦醇能够减少细胞炎症相关的表现，抑制癌症细胞的生长并诱导细胞凋亡，抑制细胞中DNA合成，改善细胞线粒体功能和葡萄糖/脂质代谢。Resveratro能够抑制多种酶的活性，如环氧合酶和脂氧化酶，PKCs和p56lck， ERK1，JNK1，p38，IKK β，Src，STAT3，核苷酸还原酶，DNA聚合酶α和 δ，PKD，PKC α，醌还原酶2，以及芳香化酶（IC50=0.035-60 μM）。

白藜芦醇是在几种植物来源中发现的众多多酚化合物之一在绝大多数情况下，白藜芦醇在微摩尔范围内显示出抑制/活化作用，这在药理学上是可能获得的，尽管也报道了具有纳摩尔范围亲和力的靶标。白藜芦醇也是一种sirtuin活化剂[1]。在增加浓度的白藜芦醇存在下，将MCF-7细胞接种在补充有5％FBS的DME-F12培养基中。对照细胞仅用相同体积的载体（0.1％乙醇）处理。白藜芦醇以剂量依赖性方式抑制MCF-7细胞的生长。加入10μM白藜芦醇导致6天后MCF-7细胞生长抑制82％，而在1μM时，仅观察到10％抑制。用10μM白藜芦醇处理的细胞具有60小时的倍增时间，而对照细胞每30小时加倍。台盼蓝排除测定显示，在10μM或更低的浓度下，白藜芦醇不影响细胞活力（90％活细胞），而在100μM时，在白藜芦醇处理6天后仅有50％的细胞存活。此外，通过ApoAlert Annexin V凋亡试剂盒[2]测定，与白藜芦醇一起孵育浓度为10μM后，MCF-7细胞不会发生凋亡。

2）体内活性
在高热量饮食小鼠中，每天白藜芦醇（22.4 mg/kg）能够增加胰岛素敏感性，降低胰岛素样生长因子-1的水平，增加AMP活化的蛋白激酶过氧化物酶体增殖物激活的受体-γ共激活因子1α的活性，增加线粒体数量，能够使其生理机能转化为正常水平，提高其存活率。白藜芦醇以50 mg / kg体重（195.5±124.8 mm3; P <0.05）或100 mg / kg体重（81.7±70.5 mm3; P <0.001）的剂量治疗，平均肿瘤体积减少 载体处理的动物（315±94mm 3）。 肿瘤体积与肿瘤质量之间存在良好的相关性[3]。

二、白藜芦醇的实验方法：
1）细胞实验
将细胞接种在平底96孔微量滴定板（4000个细胞/6.4mm直径孔）中。 12-24小时后，用DMSO（0.1-0.3％）或递增剂量的白藜芦醇处理细胞。 处理48小时后，细胞用10μLMTT试剂在37℃处理4小时，然后用100μL溶解液在37℃处理过夜。 使用分光光度微量滴定板读数器在570nm波长下测量甲product产物的量。为了确定白藜芦醇对细胞生长的影响，在存在或不存在增加浓度的白藜芦醇存在或不存在的情况下，将MCF-7细胞以每孔105个细胞接种于6mL培养基中，在2mL补充有5％FBS的DME-F12培养基中。 在用胰蛋白酶-EDTA分离细胞后，用血细胞计数器每2天测量细胞数至第6天[2]。

2）动物实验
小鼠-使用6周龄的雌性BALB / c（nu / nu）小鼠。 在皮下注射PA-1细胞（在200μLPBS中1×107）。 在右后侧。 每周三次测量肿瘤体积（长×宽×深×0.52）。 植入10天后，给予两组（n = 10）白藜芦醇（溶于5％乙醇和25％聚乙二醇400的蒸馏水中）。 连续4周每日剂量为50或100毫克/千克体重，而另一组仅接受载体。 每天记录体重。 在处死前2小时给动物给予溴脱氧尿苷（BrdUrd; 10mg / kg体重，腹膜内）。 将异种移植肿瘤称重并在液氮中冷冻或固定在10％福尔马林中并包埋在石蜡中。 使用单克隆抗BrdUrd抗体检测石蜡包埋组织中的BrdUrd标记的细胞。

综上所述：白藜芦醇是多种植物中发现的多酚类化合物之一，作用于多种靶点，作用于分别是腺苷酸环化酶，IKKβ，DNA 聚合酶 α 和 δ，IC50 分别为 0.8，1，3.3 和 5 μM。它的靶点活性为COX-1,IC50:1.1μM；COX-2,IC50:1.3μM；DNA polymerase α,3.3μM；IKKβ,1μM；LOX,IC50:3.7μM；Quinone reductase 2,35nM-50nM；SIRT1,SIRT2。

参考文献：
[1]. Pirola L, et al. Resveratrol: one molecule, many targets. IUBMB Life. 2008 May;60(5):323-32
[2]. Lu R, et al. Resveratrol, a natural product derived from grape, exhibits antiestrogenic activity and inhibits the growth of human breast cancer cells. J Cell Physiol. 1999 Jun;179(3):297-304.
[3]. Lee MH, et al. Resveratrol suppresses growth of human ovarian cancer cells in culture and in a murine xenograft model: eukaryotic elongation factor 1A2 as a potential target. Cancer Res. 2009 Sep 15;69(18):7449-58.
[4]. LI Ying, et al. Prevention of resveratrol on spatial memory loss of mice induced by calyculin A. Chin J Pathophysiol, 2017, 33(5): 951-955.