奥巴克拉甲磺酸盐_作用_生物活性_实验方法

奥巴克拉甲磺酸盐（GX15-070）是一种Bcl-2拮抗剂（Ki：0.22μM），可以帮助克服MCL-1介导的细胞凋亡抗性。

一、奥巴克拉甲磺酸盐的生物活性详解：

1）体外活性
奥巴克拉甲磺酸盐（0,0.5,1,2.5,5和10μM）有效地消除了OCI-AmL3细胞的生长，并且在HL60，KG1和U937细胞中观察到类似的结果。 奥巴克拉甲磺酸盐还显示低剂量抗增殖特性，伴随着S / G2细胞周期阻滞。在中和Mcl-1后，奥巴克拉甲磺酸盐（10μM）诱导细胞凋亡通过内在的凋亡途径进行。 奥巴克拉甲磺酸盐与AraC和ABT-737协同诱导AmL细胞系中的细胞凋亡。 奥巴克拉甲磺酸盐（250 nM）诱导细胞凋亡并选择性抑制原代AmL细胞的集落形成[1]。 奥巴克拉甲磺酸盐诱导细胞死亡，K1，BCPAP和KTC-1细胞的IC50分别为3.18μM，0.85μM和0.76μM。 奥巴克拉甲磺酸盐还通过诱导混合细胞死亡形式，MOMP丧失，线粒体呼吸抑制和细胞糖酵解来增强Vemurafenib的细胞毒性。 奥巴克拉甲磺酸盐调节authophagy的诱导和降解阶段，并促进K1细胞中Mcl-1 / Beclin-1依赖性自噬[2]。 奥巴克拉甲磺酸盐在一组人结直肠癌细胞系中抑制细胞增殖并诱导G1细胞周期停滞，并且对于HCT116，HT-29和LoVo细胞，72小时细胞增殖的IC50分别为25.85,40.69和40.01nM。 。 奥巴克拉甲磺酸盐（0,25,50,100,200nM）下调细胞周期蛋白D1以诱导G1期停滞和随后的抗增殖。 奥巴克拉甲磺酸盐（200 nM）靶向细胞周期蛋白D1，用于蛋白酶体介导的降解[3]。 奥巴克拉甲磺酸盐（500 nM，1μM）诱导坏死细胞死亡并诱导自噬阻滞，与500 nM的细胞死亡无关。 奥巴克拉甲磺酸盐定位于溶酶体，影响溶酶体结构和性质，但不会引起大量溶酶体透化[4]。

2）体内活性
LY3009120单一疗法或奥巴克拉甲磺酸盐 + Vemurafenib（20 mg / kg /天用于组合）可在甲状腺癌的皮下异种移植模型中更彻底地延缓肿瘤生长[2]。 奥巴克拉甲磺酸盐（5 mg / kg，i.p。）可有效减少小鼠肿瘤的生长[4]。

二、奥巴克拉甲磺酸盐的实验方法：

1）动物实验
携带[Pten，p53] thyr - / - 肿瘤的小鼠通过i.p.用奥巴克拉甲磺酸盐（5mg / kg）治疗。 每天注射一次，持续6天。 用Liberase解剖肿瘤并消化。 在流式细胞术分析之前，将单细胞悬浮液与100nM Lysotracker Deep Red孵育30分钟。

2）细胞实验
将奥巴克拉甲磺酸盐以5mM的储备浓度溶解在DMSO中。 通过MTT测定细胞活力。 将人MM细胞（HMCL），外周血淋巴细胞（PBL），骨髓基质细胞（BMSC）以每孔2×104的密度接种于96孔板中用于HMCL或5-10×103用于PBL。 将各种浓度的奥巴克拉甲磺酸盐加入细胞中，有或没有IGF-1（50ng / mL）或IL-6（10ng / mL）。 将细胞培养48-72小时，测定细胞活力。（仅供参考）

3）激酶实验
Bcl-2结合亲和力计算：使用SIE评分函数计算奥巴克拉甲磺酸盐与BCL-2结合的预测结合亲和力。 [4]作为确定计算可靠性的对照，计算一组12个小分子的预测结合亲和力Ki），其中实验测量的对BCL-2的结合亲和力。

综上所述：奥巴克拉甲磺酸盐是一种 BCL-2 家族拮抗剂，结合 BCL-2，Ki 约为 220 nM。 奥巴克拉甲磺酸盐抑制所有 BCL-XL，MCL-1，BCL-w，A1 和 BCL-b 的相互作用 (Ki≈1-7 μM)。它的靶点活性为Bcl-2,0.22μM(Ki)。

参考文献：
[1]. Marina Konopleva, et al. Mechanisms of Antileukemic Activity of the Novel Bcl-2 Homology Domain-3 Mimetic GX15-070 (Obatoclax). Cancer Res May 1, 2008 68; 3413
[2]. Wei WJ, et al. Obatoclax and LY3009120 Efficiently Overcome Vemurafenib Resistance in Differentiated Thyroid Cancer. Theranostics. 2017 Feb 23;7(4):987-1001.
[3]. Or CR, et al. Obatoclax, a Pan-BCL-2 Inhibitor, Targets Cyclin D1 for Degradation to Induce Antiproliferation in Human Colorectal Carcinoma Cells. Int J Mol Sci. 2016 Dec 27;18(1).
[4]. Champa D, et al. Obatoclax kills anaplastic thyroid cancer cells by inducing lysosome neutralization and necrosis. Oncotarget. 2016 Jun 7;7(23):34453-71.
[5]. Nguyen M, et al. Small molecule obatoclax (GX15-070) antagonizes MCL-1 and overcomes MCL-1-mediated resistance to apoptosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 2007 Dec 4;104(49):19512-7. Epub 2007 Nov 26.