利伐沙班的生物活性是什么

利伐沙班可阻断血液中某些凝血物质的活性。利伐沙班用于预防或治疗一种称为深静脉血栓形成（DVT）的血凝块，其可导致肺部血栓（肺栓塞）。 DVT可在某些类型的手术后发生。利伐沙班有时用于降低您接受血栓治疗至少6个月后DVT或PE的风险。利伐沙班还用于心房颤动（心律紊乱）患者，以降低血栓引起的卒中风险。

那么利伐沙班的生物活性是什么呢？
利伐沙班是一种高效的选择性Factor Xa (FXa) 抑制剂，具有强效抗FXa活性 (IC50 为 0.7 nM，Ki 为 0.4 nM)。

In Vitro: 利伐沙班（BAY 59-7939）是一种口服，直接因子Xa（FXa）抑制剂，用于预防和治疗动脉和静脉血栓形成。 利伐沙班竞争性抑制人FXa（Ki 0.4 nM），选择性比其他丝氨酸蛋白酶高10 000倍; 它还抑制凝血酶原酶活性（IC50 2.1 nM）。 利伐沙班在人和兔血浆中比在大鼠血浆中更有效地抑制内源性FXa（IC50 21 nM）（IC50 290 nM）。 它显示了人血浆中的抗凝血作用，使凝血酶原时间（PT）加倍，并激活部分促凝血酶原激酶时间分别为0.23和0.69μM。
In Vivo: 利伐沙班（BAY 59-7939）是一种有效的选择性直接FXa抑制剂，具有优异的体内活性和良好的口服生物利用度。 Rivaroxaban（BAY 59-7939），由i.v.管理。 血栓诱导前推注，减少血栓形成（ED50 0.1 mg / kg），抑制FXa，并依次延长PT剂量。 PT50和FXa在ED50处略有影响（分别增加1.8倍和32％抑制）。 在0.3 mg / kg（几乎完全抑制血栓形成的剂量）下，利伐沙班适度延长PT（3.2±0.5倍）并抑制FXa活性（65±3％）。


针对生物活性有什么具体的实验方法呢：
1. 激酶测定
利伐沙班（BAY 59-7939）对纯化的丝氨酸蛋白酶的活性使用生色或荧光底物在96孔微量滴定板中于25℃测量。将酶与利伐沙班或其溶剂DMSO一起温育10分钟。通过添加底物引发反应，并且使用Spectra Rainbow Thermo Reader在405nm连续监测颜色或荧光，或者分别使用SPECTRAfluor plus在630 / 465nm监测颜色或荧光20分钟。在以下缓冲液（终浓度）中分析酶活性：在pH8.3的50mM Tris-HCl缓冲液中的人FXa（0.5nM），兔FXa（2nM），大鼠FXa（10nM）或尿激​​酶（4nM）。 ，150mM NaCl和0.1％牛血清白蛋白（BSA）;在0.1μMTris-HCl，pH 8.0和20mM CaCl 2中的凝血酶（0.69nM），胰蛋白酶（2.2nM）或纤溶酶（3.2nM）的Pefachrome FXa（50-800μM）或染色酶U（250μM）;染色酶TH（200μM），染色质纤溶酶（500μM）或染色酶抑制剂（500μM），FXIa（1nM）或APC（10nM）在50mM磷酸盐缓冲液，pH7.4,150mM NaCl中;和S 2366（150或500μM）FVIIa（1 nM）和组织因子（3 nM）在50 mM Tris-HCl缓冲液，pH 8.0,100 mM NaCl，5 mM CaCl2和0.3％BSA，HD-Phe-Pro中的表达-Arg-6-氨基-1-萘 - 苄基磺酰胺H2O（100μM）并测量3小时。 FIXab / FX测定，包括FIXab（8.8 nM）和FX（9.5 nM）在50 mM Tris-HCl缓冲液，pH 7.4,100 mM NaCl，5 mM CaCl2和0.1％BSA中，通过添加I-1100开始（50μM），并测量60分钟。根据Cheng-Prusoff方程（Ki = IC50 / 1 + [S] / Km）计算针对FXa的抑制常数（Ki），其中[S]是底物浓度，并且Km是Michaelis-Menten常数。 Km由Lineweaver-Burk图确定。 IC50是将对照的初始速度降低50％所需的抑制剂量。
2. 动物管理
大鼠
禁食雄性Wistar大鼠（HsdCpb：WU）。 大鼠静脉淤滞模型在麻醉的大鼠中诱导血栓形成（每剂量组n = 10），稍作修改。 暴露腹腔静脉，并在左肾静脉分支下方放置两条松散缝线（间隔8-10mm）。 在血栓诱导前15分钟，将溶解在聚乙二醇/ H 2 O /甘油（996g / 100g / 60g）中的利伐沙班或载体通过静脉内（i.v.）推注注射到尾静脉中。 将促凝血酶原激酶（0.5mg / kg）注射到股静脉中，15秒后，将近端和远端缝合线系住。 15分钟后，取出结扎段，取出血栓并称重。 在血栓清除之前立即通过心脏穿刺获得血液样品。