苹果酸卡博替尼的作用和生物活性

发布时间:2018-11-08 14:54:41 编辑作者:活性达人

苹果酸卡博替尼图片

图片:苹果酸卡博替尼结构式

苹果酸卡博替尼是卡博替尼的s-苹果酸盐形式,又叫卡博替尼苹果酸盐。它是一种口服生物可利用的小分子受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂,具有潜在的抗肿瘤活性。那么它的生物活性是什么?如何做实验呢?下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍苹果酸卡博替尼的生物活性:

1)体外活性
卡博替尼对RON和PDGFRβ的抑制活性较弱,IC50分别为124nM和234nM,对FGFR1的活性较低,IC50为5.294μM。低浓度(0.1-0.5μM)的卡博替尼足以诱导组成型和诱导型Met磷酸化的显着抑制及其在MPNST细胞中产生的下游信号传导,并抑制HGF诱导的MPNST细胞迁移和侵袭。

卡博替尼(0.1-0.5μM)抑制所有MPNST细胞中的组成型和诱导型MET磷酸化及其产生的下游信号传导。它(>0.1μM)引起显着的MPNST细胞生长抑制;需要更高的苹果酸卡博替尼剂量来抑制NSC生长。博替尼还诱导细胞因子刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中Met和VEGFR2磷酸化的显着抑制。虽然卡博替尼对0.1μM的MPNST细胞生长没有显着影响,但卡博替尼在5-10μM时显着抑制MPNST细胞生长。

在细胞试验中,卡博替尼抑制MET和VEGFR2以及KIT,FLT3和AXL的磷酸化,IC50值分别为7.8,1.9,5.0,7.5和42μM。卡博替尼还响应来自MDA-MB-231(IC50=5.1nM),A431(IC50=4.1nM),HT1080(IC50=7.7nM)和B16F10(IC50=4.7nM)培养物的条件培养基抑制小管形成细胞[3]。

2)体内活性
卡博替尼(60mg/kg,i.p。)降低肿瘤血管分布,在动物中减少范围从3mg/kg的67%到30mg/kg的83%。与载体的相应值相比,在10周龄开始处理7天的RIP-Tag2小鼠中的肿瘤在XL880后小40%,在卡博替尼后小35%。卡博替尼(30mg/kg)显着降低小鼠的微血管密度[2]。

卡博替尼(100mg/kg,口服)抑制体内刺激肝脏肝细胞中HGF的MET磷酸化和VEGF刺激的FLK1磷酸化,同时抑制持续8小时后的两种靶标。卡博替尼(100mg/kg,口服)破坏肿瘤血管系统并促进肿瘤和内皮细胞死亡。卡博替尼(1-60mg/kg,口服)抑制肿瘤生长并促进体内肿瘤消退[3]。

在具有自发性胰岛肿瘤的RIP-Tag2小鼠中以30mg/kg的卡博替尼治疗破坏了83%的肿瘤脉管系统,减少了周细胞和空基底膜套管,引起广泛的肿瘤内缺氧和广泛的肿瘤细胞凋亡,并且减缓了肿瘤血管的再生停药后,与阻断VEGFR但不阻断c-Met的XL999相比,更显着,导致血管分布仅减少43%,表明VEGFR和其他功能相关的受体酪氨酸激酶(RTK)的同时抑制可放大血管生成抑制。

卡博替尼还可降低原发肿瘤的侵袭性并减少转移。[1]30mg/kg/天的卡博替尼显着消除了SCID小鼠中人MPNST异种移植物的生长和转移。卡博替尼的给药诱导乳腺癌,肺癌和神经胶质瘤肿瘤模型中肿瘤生长的剂量依赖性抑制,与肿瘤和内皮细胞增殖减少以及细胞凋亡增加有关。单次口服剂量的卡博替尼足以在100mg/kg和10mg/kg的MDA-MB-231荷瘤小鼠和携带C6肿瘤的大鼠中诱导持续的肿瘤生长抑制。

我们已经了解了它的生物活性,接下来如何做活性实验呢?一般来说,有如下的三种方法:

1)动物实验
将H441细胞(3×106)皮内植入后胁腹,当肿瘤达到约150mg时,使用下式计算肿瘤重量:(肿瘤体积=长度(mm)×宽度2(mm2)]/2,小鼠随机分组(每组n=5)并口服单剂量100mg/kg剂量的卡博替尼或载体。在指定的时间点收集肿瘤。合并的肿瘤裂解物用抗MET(SC161)进行免疫沉淀,并用抗蛋白质印迹法进行免疫沉淀。印迹剥离后,将总MET定量为上样对照。

在另一个实验中,给予幼稚小鼠(每组n=5)单次100mg/kg剂量的卡博替尼或然后在收集肝脏前10分钟静脉内给予HGF(每只小鼠10μg)。肝脏裂解液中MET磷酸化的分析如上所述。在另一个实验中,幼稚小鼠(每组n=5)给予单一100mg/kg剂量的卡博替尼或载体,然后在肺采集前30分钟静脉内施用VEGF(每只小鼠10μg)。汇集的肺裂解物用FLK1(SC6251)进行免疫沉淀,并用抗磷酸酪氨酸(4G10)进行蛋白质印迹。印迹剥离后,定量总FLK1作为上样对照。

2)细胞实验
将细胞暴露于各种浓度的卡博替尼48小时。使用CellTiter96水性非放射性细胞增殖测定试剂盒通过MTS测定确定细胞生长。在490nm的波长下测量吸光度,并且处理的细胞的吸光度值表示为未处理细胞的吸光度的百分比。

3)激酶实验
使用荧光素酶偶联的化学发光,33P-磷酰基转移或AlphaScreen技术测定卡博替尼对270种人激酶的广泛组的抑制特性。使用重组人全长,谷胱甘肽S-转移酶标签或组氨酸标签融合蛋白,并通过测量在ATP浓度等于或低于该浓度的肽底物聚(Glu,Tyr)的磷酸化来确定半数最大抑制浓度(IC50)值。每种激酶的Km。通过测定一系列ATP浓度下的IC50值,使用AlphaScreenAssay评估激酶抑制的机制。

今天介绍了苹果酸卡博替尼的作用,并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述,苹果酸卡博替尼是一种有效的 VEGFR2 抑制剂,IC50 值为 0.035 nM,同时能够抑制 c-Met,Ret,Kit,Flt-1/3/4,Tie2 和 AXL 的活性,IC50 值分别为 1.3 nM,4 nM,4.6 nM,12 nM/11.3 nM/6 nM,14.3 nM 和 7 nM。苹果酸卡博替尼的靶点活性为AXL,7.0nM;c-Met,1.3nM;Kit,4.6nM;VEGFR2/KDR,0.035nM;VEGFR3/FLT4,6.0nM。

您可能想了解苹果酸卡博替尼的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/1140909-48-3_525237.html。如果您有其他资讯方面的需求,请和化源网联系。

参考文献:
[1]. You WK, et al. VEGF and c-Met blockade amplify angiogenesis inhibition in pancreatic islet cancer. Cancer Res, 2011, 71(14), 4758-4768.
[2]. Torres KE, et al. Activated MET is a molecular prognosticator and potential therapeutic target for malignant peripheral nerve sheath tumors. Clin Cancer Res, 2011, 17(12), 3943-3955.
[3]. Yakes FM, et al. Cabozantinib (XL184), a novel MET and VEGFR2 inhibitor, simultaneously suppresses metastasis, angiogenesis, and tumor growth. Mol Cancer Ther, 2011, 10(12), 2298-2308.

相关化合物:苹果酸卡博替尼

上一篇:雷尼替丁的功效与作用。雷尼替丁有什么副作用?

下一篇:莫特塞尼的作用和生物活性