夫拉平度盐酸盐的作用 - 生物活性 - 靶点活性
发布时间：2018-11-28 21:35:57 编辑作者：活性达人
图片：夫拉平度盐酸盐结构式
夫拉平度盐酸盐盐酸盐，英文名Flavopiridol hydrochloride，别名Alvocidib hydrochloride，CAS号是131740-09-5，它是一种合成的N-甲基哌啶基氯苯基黄酮化合物。作为细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制剂，阿维菌素通过阻止细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）的磷酸化和下调细胞周期蛋白D1和D3表达诱导细胞周期停滞，导致G1细胞周期停滞和细胞凋亡。该药剂也是三磷酸腺苷活性的竞争性抑制剂。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍夫拉平度盐酸盐的生物活性：
1）体外活性
夫拉平度（2μM）在CLL细胞中强烈诱导ER应激的独特模式，通过IRE1介导的ASK1激活和可能的下游caspase促进细胞死亡[1]。夫拉平度在持续4-24小时的治疗中导致许多PRG的有效上调。夫拉平度对几种PRG的表达具有即时和长期作用。在用血清再刺激的血清饥饿细胞中，夫拉平度也抑制这些基因的表达，但随后，JUNB，GADD45B和EGR1在夫拉平度存在下被上调[2]。
夫拉平度以时间和浓度依赖性方式诱导人类乳腺癌细胞G1期阻滞并抑制CDK2和CDK4。夫拉平度约12小时的短时处理，会诱导造血细胞系（包括SUDHL4，SUDHL6（B细胞系），Jurkat和MOLT4（T细胞系）和HL60（骨髓））的细胞凋亡。一项研究夫拉平度处理可诱导人成胶质细胞瘤T98G细胞系产生大量的AKT-Ser473磷酸化。在克隆形成实验中，夫拉平度在23人肿瘤模型中作为高效的细胞毒性化合物，平均IC70是8 ng/mL。
2）体内活性
在SUDHL-4皮下注射淋巴瘤模型的老鼠中静脉注射7.5 mg/kg 夫拉平度，模型鼠的肿瘤大部分（8分之2）或者完全（8分之4）消退，其中两只动物保持无病状持续60天以上，整体生长延迟73.2％。每天以最大耐受剂量10 mg/kg 口服给药夫拉平度，在第1-4天及7-11天，影响PRXF1337的肿瘤消退，在PRXF1369中肿瘤停滞持续4周。用7.5 mg/kg 夫拉平度静脉内、或腹膜内连续注射夫拉平度5天后，12个晚期皮下（sc）人HL-60异种移植鼠中的11个肿瘤完全消退，治疗一疗程后移植鼠数月无病。
我们已经了解了夫拉平度盐酸盐的生物活性，接下来如何做活性实验呢？具体有如下三种实验方法：
1）动物实验
动物模型：人前列腺癌异种移植物，PRXFI337和PRXFI369，生长于s.c. 裸鼠[4]人早幼粒细胞白血病HL-60，人B细胞滤泡性淋巴瘤SUDHL-4和获得性免疫缺陷综合征（艾滋病）-r。
2）细胞实验
将以1×10 6个细胞/ mL的密度生长的细胞暴露于夫拉平度，持续不同的浓度和时间段。提取DNA。简而言之，用冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞一次，并用3mL裂解缓冲液（5mM Tris-HCL [pH 7.5]; 20mM EDTA; 0.5％Triton X-100）在4°下裂解15分钟。通过离心（在26,000g，4℃下20分钟）分离细胞裂解物的染色质。含有小DNA片段的上清液依次用苯酚，苯酚：氯仿（1：1）和氯仿萃取。将核酸在0.5M NaCl，90％乙醇中于-20℃沉淀过夜。然后用牛RNAaseA（60μg/ mL）消化RNA。在连续再提取和再沉淀后，将DNA溶解于10mM Tris-HCL（pH 7.5），1mM EDTA，0.5％十二烷基硫酸钠（SDS）中，然后在1.6％琼脂糖凝胶上电泳。
3）激酶实验
重组CDK激酶反应：如下在微量滴定板中测定CDK活性。将40μgGst-Rb与不同量的夫拉平度和未标记的ATP混合。然后通过加入从表达重组人CDK的昆虫细胞获得的S100级分的硫酸铵切片开始反应。最终反应条件是10mM MgCl 2,50mM Tris-HCl（pH 7.5）和1mM DTT。相应地调整ATP的最终浓度。放射性标记的ATP用作磷酰基供体。加入酶后，反应在30℃下进行2.5分钟，然后加入EDTA终止反应。然后用谷胱甘肽 - 琼脂糖凝胶捕获Gst-Rb，并通过液体闪烁计数测定掺入的放射性。
今天介绍了夫拉平度盐酸盐的作用，并且详细地说明了它的生物实验方法。综上所述，夫拉平度盐酸盐Flavopiridol Hydrochloride是一种 CDK 的广谱抑制剂，与 ATP 竞争性地抑制 CDK1，CDK2 和 CDK4 的活性，IC50 值分别为 30, 170, 100 nM。它的靶点活性是CDK1,40nM；CDK2,40nM；CDK4,40nM；CDK6,40nM；CDK7,300nM。
您可能想了解夫拉平度盐酸盐的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/131740-09-5_332499.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
1. Senderowicz AM, Oncologist, 2002, 7 Suppl 3:12-9.
2. Carlson BA, et al, Cancer Res, 1996, 56(13), 2973-2978.
3. Parker BW, et al, Blood, 1998, 91(2), 458-465.
4. Drees M, et al, Clin Cancer Res, 1997, 3(2), 273-279.
5. Caracciolo V, et al, Cell Cycle, 2012, 11(6), 1202-1216.
6. Arguello F,et al, Blood, 1998, 91(7), 2482-2490.
首先我们介绍夫拉平度盐酸盐的生物活性：
1）体外活性
夫拉平度（2μM）在CLL细胞中强烈诱导ER应激的独特模式，通过IRE1介导的ASK1激活和可能的下游caspase促进细胞死亡[1]。夫拉平度在持续4-24小时的治疗中导致许多PRG的有效上调。夫拉平度对几种PRG的表达具有即时和长期作用。在用血清再刺激的血清饥饿细胞中，夫拉平度也抑制这些基因的表达，但随后，JUNB，GADD45B和EGR1在夫拉平度存在下被上调[2]。
夫拉平度以时间和浓度依赖性方式诱导人类乳腺癌细胞G1期阻滞并抑制CDK2和CDK4。夫拉平度约12小时的短时处理，会诱导造血细胞系（包括SUDHL4，SUDHL6（B细胞系），Jurkat和MOLT4（T细胞系）和HL60（骨髓））的细胞凋亡。一项研究夫拉平度处理可诱导人成胶质细胞瘤T98G细胞系产生大量的AKT-Ser473磷酸化。在克隆形成实验中，夫拉平度在23人肿瘤模型中作为高效的细胞毒性化合物，平均IC70是8 ng/mL。
2）体内活性
在SUDHL-4皮下注射淋巴瘤模型的老鼠中静脉注射7.5 mg/kg 夫拉平度，模型鼠的肿瘤大部分（8分之2）或者完全（8分之4）消退，其中两只动物保持无病状持续60天以上，整体生长延迟73.2％。每天以最大耐受剂量10 mg/kg 口服给药夫拉平度，在第1-4天及7-11天，影响PRXF1337的肿瘤消退，在PRXF1369中肿瘤停滞持续4周。用7.5 mg/kg 夫拉平度静脉内、或腹膜内连续注射夫拉平度5天后，12个晚期皮下（sc）人HL-60异种移植鼠中的11个肿瘤完全消退，治疗一疗程后移植鼠数月无病。
我们已经了解了夫拉平度盐酸盐的生物活性，接下来如何做活性实验呢？具体有如下三种实验方法：
1）动物实验
动物模型：人前列腺癌异种移植物，PRXFI337和PRXFI369，生长于s.c. 裸鼠[4]人早幼粒细胞白血病HL-60，人B细胞滤泡性淋巴瘤SUDHL-4和获得性免疫缺陷综合征（艾滋病）-r。
2）细胞实验
将以1×10 6个细胞/ mL的密度生长的细胞暴露于夫拉平度，持续不同的浓度和时间段。提取DNA。简而言之，用冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞一次，并用3mL裂解缓冲液（5mM Tris-HCL [pH 7.5]; 20mM EDTA; 0.5％Triton X-100）在4°下裂解15分钟。通过离心（在26,000g，4℃下20分钟）分离细胞裂解物的染色质。含有小DNA片段的上清液依次用苯酚，苯酚：氯仿（1：1）和氯仿萃取。将核酸在0.5M NaCl，90％乙醇中于-20℃沉淀过夜。然后用牛RNAaseA（60μg/ mL）消化RNA。在连续再提取和再沉淀后，将DNA溶解于10mM Tris-HCL（pH 7.5），1mM EDTA，0.5％十二烷基硫酸钠（SDS）中，然后在1.6％琼脂糖凝胶上电泳。
3）激酶实验
重组CDK激酶反应：如下在微量滴定板中测定CDK活性。将40μgGst-Rb与不同量的夫拉平度和未标记的ATP混合。然后通过加入从表达重组人CDK的昆虫细胞获得的S100级分的硫酸铵切片开始反应。最终反应条件是10mM MgCl 2,50mM Tris-HCl（pH 7.5）和1mM DTT。相应地调整ATP的最终浓度。放射性标记的ATP用作磷酰基供体。加入酶后，反应在30℃下进行2.5分钟，然后加入EDTA终止反应。然后用谷胱甘肽 - 琼脂糖凝胶捕获Gst-Rb，并通过液体闪烁计数测定掺入的放射性。
今天介绍了夫拉平度盐酸盐的作用，并且详细地说明了它的生物实验方法。综上所述，夫拉平度盐酸盐Flavopiridol Hydrochloride是一种 CDK 的广谱抑制剂，与 ATP 竞争性地抑制 CDK1，CDK2 和 CDK4 的活性，IC50 值分别为 30, 170, 100 nM。它的靶点活性是CDK1,40nM；CDK2,40nM；CDK4,40nM；CDK6,40nM；CDK7,300nM。
您可能想了解夫拉平度盐酸盐的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/131740-09-5_332499.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
1. Senderowicz AM, Oncologist, 2002, 7 Suppl 3:12-9.
2. Carlson BA, et al, Cancer Res, 1996, 56(13), 2973-2978.
3. Parker BW, et al, Blood, 1998, 91(2), 458-465.
4. Drees M, et al, Clin Cancer Res, 1997, 3(2), 273-279.
5. Caracciolo V, et al, Cell Cycle, 2012, 11(6), 1202-1216.
6. Arguello F,et al, Blood, 1998, 91(7), 2482-2490.
相关化合物：夫拉平度盐酸盐