赛度替尼的生物活性

赛度替尼是SYK，JAK1，JAK3和TYK2的选择性有效抑制剂。 临床前和临床数据表明，联合SYK / JAK抑制可能在B细胞和T细胞NHL中具有活性。 SYK是BCR信号传导的关键调节因子（BTK和PI3K的上游），并且也在T细胞淋巴瘤中表达。 临床前研究表明它可能是PTCL的致癌驱动因素。 在B细胞和T细胞NHL中观察到频繁激活JAK / STAT突变。 2016年完成了43例患有r / r CLL和NHL的赛度替尼的1期剂量递增研究。对SYK和JAK的完全抑制具有良好的耐受性，并且在CLL和FL中观察到一致的抗肿瘤活性。

一、赛度替尼的生物活性详解：
1）体外活性
赛度替尼对60 CLL具有抑制作用，IC50范围为0.37至10.02μM。 赛度替尼诱导CLL细胞凋亡，与MCL-1下调和PARP裂解有关。 赛度替尼（2μM）能够克服微环境的支持并诱导CLL细胞死亡。 赛度替尼（250-500nM）阻断依鲁替尼敏感和依鲁替尼抗原初级CLL细胞的增殖。 赛度替尼还阻断依鲁替尼敏感和依鲁替尼耐药的原发性CLL细胞以及BTKC481S转染的细胞系的增殖，并阻断BCR和JAK-STAT信号传导途径。此外，赛度替尼对SYK和JAK的抑制转化为AKT和ERK的下游抑制。 赛度替尼抑制NF-kB通路的活性[1]。 PRT062070降低刺激的B细胞上调早期活化标记物CD69的细胞表面表达的能力（IC50 =0.11μM）。 PRT062070表现出对细胞因子JAK / STAT信号通路的不同效力。 PRT062070（1或3μM）在BCR信号感受态NHL细胞系中诱导细胞凋亡[2]。 赛度替尼显示出对DLBCL细胞的ABC和GCB亚型的抑制活性。 赛度替尼还通过胱天蛋白酶3和PARP切割在DLBCL细胞系的GCB和ABC亚型中诱导凋亡。并且赛度替尼通过抑制RB磷酸化和下调细胞周期蛋白E来阻断DLBCL的ABC和GCB亚型中的细胞周期。在所有DLBCL细胞系中，赛度替尼在BCR刺激的条件下诱导细胞周期停滞和凋亡。此外，赛度替尼阻断ABC和GCB DLBCL细胞系中的JAK / STAT和BCR信号传导。 赛度替尼在原代人DLBCL样本中诱导细胞死亡[3]。 赛度替尼以剂量依赖性方式抑制BCR诱导的信号，并且最强烈地在0.3至1μM之间。特别是在具有更高BCR信号传导能力和对IL4反应的IGHV未突变样品中，或表达更高水平的sIgM，CD49d +或ZAP70 +的样品中。 赛度替尼通过阻止MCL-1和BCL-XL的上调克服了抗IgM，IL4 / CD40L或NLC介导的保护作用;然而，BCL-2表达不受影响。此外，在用IL4 / CD40L处理的样品中，赛度替尼在体外与venetoclax协同作用，诱导比单独使用药物更多的细胞凋亡[4]。
2）体内活性
PRT062070（0.5mg / kg）导致踝关节炎症减少的非统计学显着趋势，而1.5,3和5mg / kg剂量实现炎症的显着减少。 PRT062070还影响抗胶原抗体的形成。 PRT062070（15mg / kg）抑制脾脏B细胞表面CD80 / 86和CD69的上调，并且在小鼠口服给药后抑制脾脏中的BCR信号传导和活化[2]。

二、赛度替尼的生物活性实验方法
细胞实验：将赛度替尼溶解在DMSO中。 使用试剂盒V，在Amaxa Nucleofector上的程序U-13，用WT BTK或BTKC481S突变体的构建体转染TMD8细胞。 转染后，将细胞与24孔板中的NKTert细胞共培养24小时以进行回收。 然后将依鲁替尼，赛度替尼和载体（DMSO）加入到转染的TMD8细胞中，并使用Muse Cell Analyzer分析用MuseTM Count＆Viability试剂盒测定细胞活力。 使用膜联蛋白V / 7-AAD凋亡检测试剂盒I在新鲜分离的CLL细胞上通过流式细胞术测定细胞存活。

综上所述，赛度替尼是一种高效、可口服的，ATP 竞争性的 JAK 和 SYK 的抑制剂，对 TYK2 和 SYK 的 IC50 值分别为 0.5 nM 和 32 nM。

参考文献：
[1]. Guo A, et al. Dual SYK/JAK inhibition overcomes ibrutinib resistance in chronic lymphocytic leukemia: Cerdulatinib, but not ibrutinib, induces apoptosis of tumor cells protected by the microenvironment. Oncotarget. 2017 Feb 21;8(8):12953-12967.
[2]. Coffey G, et al. The novel kinase inhibitor PRT062070 (Cerdulatinib) demonstrates efficacy in models of autoimmunity and B-cell cancer. J Pharmacol Exp Ther. 2014 Dec;351(3):538-48.
[3]. Ma J, et al. Cerdulatinib, a novel dual SYK/JAK kinase inhibitor, has broad anti-tumor activity in both ABC and GCB types of diffuse large B cell lymphoma. Oncotarget. 2015 Dec 22;6(41):43881-96.
[4]. Blunt MD, et al. The Dual Syk/JAK Inhibitor Cerdulatinib Antagonizes B-cell Receptor and Microenvironmental Signaling in Chronic Lymphocytic Leukemia. Clin Cancer Res. 2017 May 1;23(9):2313-2324.