SCRIPTAID-作用-生物活性-靶点活性
发布时间：2018-12-31 19:35:19 编辑作者：活性小子
图片：与scriptaid结构式
SCRIPTAID是HDAC的抑制剂，对乙酰化H4的影响大于H3。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍SCRIPTAID的生物活性：
1）体外活性
SCRIPTAID（6μM）导致PANC-1细胞中组蛋白乙酰化增加> 100倍。SCRIPTAID（8μM）对PANC-1细胞不致死，对MDAMB-468的作用有限（80％存活率）。SCRIPTAID增加pCMVb，p6SBE-luc和p6MBE-luc的转录，而不依赖于转录的阳性诱导物。
SCRIPTAID能够诱导p6MBE-luc，pCMVb和pUB6 / V5-LacZ的高表达，由病毒（SV40和CMV）或人（泛素c，UB6）启动子驱动，这些启动子不依赖于增强子的特异性（ SBE与MBE），启动子的类型（病毒对细胞），报告基因的产物（荧光素酶对b-gal），也不是报告基因构建体的整合状态。[1] SCRIPTAID诱导高体细胞核移植（SCNT）卵母细胞发育至胚泡期，并允许全部发育（3.4,4.2,7.6,6.8和4.1％），所有浓度（50,100,250，分别为500和2000nM）。
SCRIPTAID以剂量依赖性方式改善克隆B6D2F1胚胎的足月发育，最大效应为250 nM。SCRIPTAID能够克隆所有重要的近交系小鼠品系，例如C57BL / 6，C3H / He，DBA / 2和129 / Sv。SCRIPTAID处理增强了克隆胚胎中新合成的mRNA水平。250 nM SCRIPTAID治疗长达48小时，不会抑制ICSI受精胚胎的发育。[2] SCRIPTAID抑制弓形虫速殖子增殖，IC50为39 nM。SCRIPTAID（0.225μM）完全保护HS68单层从弓形虫速殖子。[3]
SCRIPTAID抑制ER阴性细胞系MDA-MB-231，MDA-MB-435和Hs578t的生长，处理48小时后IC50为0.5-1.0μg/ mL。处理48小时的1μg/ ml SCRIPTAID诱导乙酰化H3和乙酰化H4组蛋白尾部蛋白的积累，并且ER mRNA转录物的最大增加20,000倍。[4] SCRIPTAID抑制Ishikawa子宫内膜癌细胞系和SK-OV-3卵巢癌细胞系的增殖和活力，IC50分别为9μM和55μM，而正常人子宫内膜上皮细胞显示出很小的敏感性。
在SCRIPTAID存在下培养2天的子宫内膜癌细胞和卵巢癌细胞显示细胞周期的G0 / G1期（5μM的SCRIPTAID）和G2 / M期（10μM的SCRIPTAID）的累积，伴随着减少S期的比例。10μM的SCRIPTAID诱导56.1％的凋亡Ishikawa细胞，线粒体膜电位丧失，细胞周期蛋白A和bcl-2水平分别降低50％和20％。[5]
2）体内活性
SCRIPTAID在1.5至5.5 mg / kg时引起病灶大小的剂量依赖性减少（最大降低45％），并且在模式率TBI模型中在伤后30分钟时，运动和认知缺陷伴随衰减。即使治疗延迟至伤后12小时，也可实现可比较的保护。对运动和认知功能的保护是持久的，因为在伤后35天检测到类似的改善。SCRIPTAID诱导存活神经元的增加（42％），以及它们在海马CA3区和周围皮质内的过程的数量/长度。
SCRIPTAID治疗可预防皮质和CA3海马神经元中由TBI诱导的染色体10（p-PTEN）上缺失的磷酸化AKT（p-AKT）和磷酸化磷酸酶和张力蛋白同源物的减少。[6] SCRIPTAID治疗（3.5 mg / kg）明显抑制人乳腺癌异种移植物MDA-MB-231模型中的肿瘤生长，使肿瘤体积减少75％。[4]
我们已经了解了SCRIPTAID的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）细胞实验
通过MTT测定在MDA-MB-231，MDA-MB-435和Hs578t细胞中测定SCRIPTAID的IC50浓度。对于细胞生长测定，将MDA-MB-231，MDA-MB-435和Hs578t细胞以5000个细胞/孔的细胞密度接种在12孔板中，并用1.0μg/ mL SCRIPTAID处理长达3天。每天使用Coulter计数器计数细胞。通过比较处理和未处理的细胞来确定生长抑制百分比[1]。
2）动物实验
在实验期间，将4-6周龄无胸腺雌性裸鼠圈养在环境控制的无病原体动物设施中的层流罩下。小鼠向每个侧腹注射2×106个MDA-MB-231人乳腺癌细胞。在治疗前使肿瘤直径增大至约0.1cm 3。然后用SCRIPTAID（3.5μg/ g小鼠），TSA（0.5μg/ g小鼠）或DMSO载体腹膜内处理小鼠，连续5天，每周休息2天，共4周。每周从每个侧翼记录个体肿瘤测量值[1]。
3）激酶实验
组蛋白乙酰化的免疫印迹测定：在培养基中用2μg/ mL SCRIPTAID处理PANC-1细胞18小时。用胰蛋白酶-EDTA收获经处理和未经处理的细胞，用PBS洗涤，并重悬于蛋白质样品缓冲液中。蛋白质浓度通过BCA蛋白质测定试剂测定。
将来自每个样品的50μg蛋白质上样到12％变性聚丙烯酰胺凝胶上。随后使用MilliblotGraphite Electroblotter I将蛋白质转移到尼龙膜上。将尼龙膜与兔抗人乙酰基 - 赖氨酸抗体一起孵育，然后与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔抗体，用SuperSignal底物显色，并通过膜检测。
今天介绍了SCRIPTAID的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，SCRIPTAID是一种组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，可用于癌症研究。它的靶点活性是HDAC。
您可能想了解SCRIPTAID的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/287383-59-9_331470.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
1. Su GH, et al. Cancer Res, 2000, 60(12), 3137-3142.
2. Van Thuan N, et al. Reproduction, 2009, 138(2), 309-317.
3. Strobl JS, et al. J Parasitol, 2007, 93(3), 694-700.
4. Keen JC, et al. Breast Cancer Res Treat, 2003, 81(3), 177-186.
5. Takai N, et al. Int J Mol Med, 2006, 17(2), 323-329.
6. Wang G, et al. Neurotherapeutics, 2013, 10(1), 124-142.
首先我们介绍SCRIPTAID的生物活性：
1）体外活性
SCRIPTAID（6μM）导致PANC-1细胞中组蛋白乙酰化增加> 100倍。SCRIPTAID（8μM）对PANC-1细胞不致死，对MDAMB-468的作用有限（80％存活率）。SCRIPTAID增加pCMVb，p6SBE-luc和p6MBE-luc的转录，而不依赖于转录的阳性诱导物。
SCRIPTAID能够诱导p6MBE-luc，pCMVb和pUB6 / V5-LacZ的高表达，由病毒（SV40和CMV）或人（泛素c，UB6）启动子驱动，这些启动子不依赖于增强子的特异性（ SBE与MBE），启动子的类型（病毒对细胞），报告基因的产物（荧光素酶对b-gal），也不是报告基因构建体的整合状态。[1] SCRIPTAID诱导高体细胞核移植（SCNT）卵母细胞发育至胚泡期，并允许全部发育（3.4,4.2,7.6,6.8和4.1％），所有浓度（50,100,250，分别为500和2000nM）。
SCRIPTAID以剂量依赖性方式改善克隆B6D2F1胚胎的足月发育，最大效应为250 nM。SCRIPTAID能够克隆所有重要的近交系小鼠品系，例如C57BL / 6，C3H / He，DBA / 2和129 / Sv。SCRIPTAID处理增强了克隆胚胎中新合成的mRNA水平。250 nM SCRIPTAID治疗长达48小时，不会抑制ICSI受精胚胎的发育。[2] SCRIPTAID抑制弓形虫速殖子增殖，IC50为39 nM。SCRIPTAID（0.225μM）完全保护HS68单层从弓形虫速殖子。[3]
SCRIPTAID抑制ER阴性细胞系MDA-MB-231，MDA-MB-435和Hs578t的生长，处理48小时后IC50为0.5-1.0μg/ mL。处理48小时的1μg/ ml SCRIPTAID诱导乙酰化H3和乙酰化H4组蛋白尾部蛋白的积累，并且ER mRNA转录物的最大增加20,000倍。[4] SCRIPTAID抑制Ishikawa子宫内膜癌细胞系和SK-OV-3卵巢癌细胞系的增殖和活力，IC50分别为9μM和55μM，而正常人子宫内膜上皮细胞显示出很小的敏感性。
在SCRIPTAID存在下培养2天的子宫内膜癌细胞和卵巢癌细胞显示细胞周期的G0 / G1期（5μM的SCRIPTAID）和G2 / M期（10μM的SCRIPTAID）的累积，伴随着减少S期的比例。10μM的SCRIPTAID诱导56.1％的凋亡Ishikawa细胞，线粒体膜电位丧失，细胞周期蛋白A和bcl-2水平分别降低50％和20％。[5]
2）体内活性
SCRIPTAID在1.5至5.5 mg / kg时引起病灶大小的剂量依赖性减少（最大降低45％），并且在模式率TBI模型中在伤后30分钟时，运动和认知缺陷伴随衰减。即使治疗延迟至伤后12小时，也可实现可比较的保护。对运动和认知功能的保护是持久的，因为在伤后35天检测到类似的改善。SCRIPTAID诱导存活神经元的增加（42％），以及它们在海马CA3区和周围皮质内的过程的数量/长度。
SCRIPTAID治疗可预防皮质和CA3海马神经元中由TBI诱导的染色体10（p-PTEN）上缺失的磷酸化AKT（p-AKT）和磷酸化磷酸酶和张力蛋白同源物的减少。[6] SCRIPTAID治疗（3.5 mg / kg）明显抑制人乳腺癌异种移植物MDA-MB-231模型中的肿瘤生长，使肿瘤体积减少75％。[4]
我们已经了解了SCRIPTAID的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）细胞实验
通过MTT测定在MDA-MB-231，MDA-MB-435和Hs578t细胞中测定SCRIPTAID的IC50浓度。对于细胞生长测定，将MDA-MB-231，MDA-MB-435和Hs578t细胞以5000个细胞/孔的细胞密度接种在12孔板中，并用1.0μg/ mL SCRIPTAID处理长达3天。每天使用Coulter计数器计数细胞。通过比较处理和未处理的细胞来确定生长抑制百分比[1]。
2）动物实验
在实验期间，将4-6周龄无胸腺雌性裸鼠圈养在环境控制的无病原体动物设施中的层流罩下。小鼠向每个侧腹注射2×106个MDA-MB-231人乳腺癌细胞。在治疗前使肿瘤直径增大至约0.1cm 3。然后用SCRIPTAID（3.5μg/ g小鼠），TSA（0.5μg/ g小鼠）或DMSO载体腹膜内处理小鼠，连续5天，每周休息2天，共4周。每周从每个侧翼记录个体肿瘤测量值[1]。
3）激酶实验
组蛋白乙酰化的免疫印迹测定：在培养基中用2μg/ mL SCRIPTAID处理PANC-1细胞18小时。用胰蛋白酶-EDTA收获经处理和未经处理的细胞，用PBS洗涤，并重悬于蛋白质样品缓冲液中。蛋白质浓度通过BCA蛋白质测定试剂测定。
将来自每个样品的50μg蛋白质上样到12％变性聚丙烯酰胺凝胶上。随后使用MilliblotGraphite Electroblotter I将蛋白质转移到尼龙膜上。将尼龙膜与兔抗人乙酰基 - 赖氨酸抗体一起孵育，然后与辣根过氧化物酶偶联的山羊抗兔抗体，用SuperSignal底物显色，并通过膜检测。
今天介绍了SCRIPTAID的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，SCRIPTAID是一种组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，可用于癌症研究。它的靶点活性是HDAC。
您可能想了解SCRIPTAID的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/287383-59-9_331470.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
1. Su GH, et al. Cancer Res, 2000, 60(12), 3137-3142.
2. Van Thuan N, et al. Reproduction, 2009, 138(2), 309-317.
3. Strobl JS, et al. J Parasitol, 2007, 93(3), 694-700.
4. Keen JC, et al. Breast Cancer Res Treat, 2003, 81(3), 177-186.
5. Takai N, et al. Int J Mol Med, 2006, 17(2), 323-329.
6. Wang G, et al. Neurotherapeutics, 2013, 10(1), 124-142.
相关化合物：与scriptaid