金雀异黄酮的生物活性和实验方法
发布时间：2018-10-19 11:40:32 编辑作者：活性小子
图片：染料木素结构式
金雀异黄酮是一种衍生自大豆制品的异黄酮。它抑制蛋白质 - 酪氨酸激酶和拓扑异构酶-II（DNA TOPOISOMERASES，TYPE II），具有抗肿瘤和抗肿瘤活性。
一、金雀异黄酮的生物活性详解：
1）体外活性
金雀异黄素抑制血清刺激的MCF-7和T47D ER +细胞的生长，分别通过染料排除分别为7.6和8.7μg/ mL，通过[3H]胸苷掺入分别为8.7和10.6μg/ mL。 这些值分别类似于MTT测定法获得的MCF-7和T47D ER +细胞的IC50值分别为9.4和7μg/ mL。 此外，与孵育8小时的对照细胞相比，浓度高达20μg/ mL的染料木黄酮不会改变MTT线粒体减少。 此外，发现生物素A或大豆苷元都不会干扰IC50浓度下的MTT测定。 因此，在研究的系统中，MTT分析对于确定金雀异黄酮在20μg/ mL浓度下的生长抑制是有效的[1]。金雀异黄酮作为GPR30受体的激动剂，能够与PPARγ结合（Ki=5.7μM）。在A431表皮癌细胞中，金雀异黄酮抑制EGF刺激的酪氨酸磷酸化。在NIH-3T3细胞中，金雀异黄酮阻断EGF，胰岛素和凝血酶介导的促有丝分裂作用。
2）体内活性
对于成年动物的乳腺癌，前列腺癌和其它内分泌依赖性肿瘤，金雀异黄酮具有预防作用。在小鼠中，金雀异黄酮与前列腺肿瘤辐射结合，能够抑制原发性肿瘤的生长，控制肿瘤细胞向主动脉旁淋巴结的转移。在本研究中，与盐水组相比，吗啡的有效剂量导致小鼠睾丸重量显着降低（p = 0.00）。 此外，与吗啡组相比，所有剂量的染料木黄酮和金雀异黄素加吗啡的治疗动物的睾丸重量显着增加（p = 0.028）。 与盐水组相比，吗啡引起睾酮，LH和FSH激素的显着降低（p = 0.00）。 此外，与吗啡组相比，金雀异黄酮（p <0.05）和金雀异黄酮加吗啡在所有组中的睾酮，LH和FSH激素均显着增加（p = 0.024）[2]。 双酚A（BPA）单独处理并与金雀异黄酮联合处理对STD或HFD喂养大鼠肝脏中LC3II和PPARα蛋白表达无显着影响（P> 0.05; P> 0.05）。 与HFD组或HFD-BPA组相比，当给予大鼠染料木黄酮时，观察到肝脏中PPARγ的蛋白质表达显着降低[3]。
二、金雀异黄酮的生物活性实验方法：
1）细胞实验
通过MTT测定确定染料木黄酮的IC 50值。 简而言之，MTT测定法是比色测定法，其基于活的但不是死细胞将基于四唑鎓的化合物还原成蓝色甲product产物的能力。 将甲crystals晶体溶解在DMSO中，并在540nm下测量吸光度。 540nm处的吸光度与活细胞数成比例。 将通过MTT测定获得的lC50值与通过使用台盼蓝染料排除和通过氚化胸苷掺入DNA计数活细胞获得的lC50值进行比较[1]。
2）动物实验
小鼠-使用Balb / c雄性小鼠。金雀异黄素如下施用：在第1-30天，金雀异黄素每日一次，腹膜内注射。吗啡加金雀异黄素按如下方式给药：在第1-30天，金雀异黄素每日一次加吗啡，腹腔注射（17,18）。施用相同体积的盐水。将小鼠随机分成8组（n = 6）。 1）生理盐水组（1 mL DW /每日）; 2）吗啡处理组; 3）金雀异黄酮 1 mg / kg处理组; 4）染料木黄酮2mg / kg处理组5）金雀异黄酮 4mg / kg处理组; 6）吗啡加金雀异黄酮 1 mg / kg处理组; 7）吗啡加金雀异黄酮 2 mg / kg处理组; 8）吗啡加金雀异黄酮 4mg / kg处理组。
大鼠-使用雄性8周龄Wistar大鼠（150-180g）。适应一周后，将所有大鼠随机分为8组，每组10只，按如下方式处理35周：（1）STD组饲喂啮齿动物标准饲料（STD）; （2）STD-BPA组给予STD并给予BPA（50μg/ kg /天）; （3）STD-（BPA + G）组给予STD并给予BPA（50μg/ kg /天）加金雀异黄酮（10mg / kg /天）; （4）STD-G组给予STD并给予金雀异黄酮（10mg / kg /天）; （5）HFD组接受高脂饮食（HFD）; （6）HFD-BPA组给予HFD并给予BPA（50μg/ kg /天）; （7）STD-（BPA + G）组给予HFD并给予BPA（50μg/ kg /天）加金雀异黄酮（10mg / kg /天）; （8）HFD-G组给予HFD并给予金雀异黄酮（10mg / kg /天）。所有男性同性恋者连续治疗35周。先前已经描述了BPA（50μg/ kg /天）和染料木黄酮（10mg / kg /天）处理方法的细节：将BPA溶解在玉米油中并用三种储备溶液稀释（20,40,80和120）微克/毫升）。
综上所述：金雀异黄酮是一种有效的蛋白酪氨酸激酶 (PTK) 抑制剂，抑制 EGFR，IC50 为 0.7 μg/mL (0.6 μM)。它的靶点活性为EGFR。
参考文献：
[1]. Peterson G, et al. Genistein inhibits both estrogen and growth factor-stimulated proliferation of human breast cancer cells. Cell Growth Differ. 1996 Oct;7(10):1345-51.
[2]. Jalili C, et al. Effect of Genistein on reproductive parameter and serum nitric oxide levels in morphine-treated mice. Int J Reprod Biomed (Yazd). 2016 Feb;14(2):95-102.
[3]. Ding S, et al. Environmentally Relevant Dose of Bisphenol A Does Not Affect Lipid Metabolism and Has No Synergetic or Antagonistic Effects on Genistein's Beneficial Roles on Lipid Metabolism. PLoS One. 2016 May 12;11(5):e0155352.
一、金雀异黄酮的生物活性详解：
1）体外活性
金雀异黄素抑制血清刺激的MCF-7和T47D ER +细胞的生长，分别通过染料排除分别为7.6和8.7μg/ mL，通过[3H]胸苷掺入分别为8.7和10.6μg/ mL。 这些值分别类似于MTT测定法获得的MCF-7和T47D ER +细胞的IC50值分别为9.4和7μg/ mL。 此外，与孵育8小时的对照细胞相比，浓度高达20μg/ mL的染料木黄酮不会改变MTT线粒体减少。 此外，发现生物素A或大豆苷元都不会干扰IC50浓度下的MTT测定。 因此，在研究的系统中，MTT分析对于确定金雀异黄酮在20μg/ mL浓度下的生长抑制是有效的[1]。金雀异黄酮作为GPR30受体的激动剂，能够与PPARγ结合（Ki=5.7μM）。在A431表皮癌细胞中，金雀异黄酮抑制EGF刺激的酪氨酸磷酸化。在NIH-3T3细胞中，金雀异黄酮阻断EGF，胰岛素和凝血酶介导的促有丝分裂作用。
2）体内活性
对于成年动物的乳腺癌，前列腺癌和其它内分泌依赖性肿瘤，金雀异黄酮具有预防作用。在小鼠中，金雀异黄酮与前列腺肿瘤辐射结合，能够抑制原发性肿瘤的生长，控制肿瘤细胞向主动脉旁淋巴结的转移。在本研究中，与盐水组相比，吗啡的有效剂量导致小鼠睾丸重量显着降低（p = 0.00）。 此外，与吗啡组相比，所有剂量的染料木黄酮和金雀异黄素加吗啡的治疗动物的睾丸重量显着增加（p = 0.028）。 与盐水组相比，吗啡引起睾酮，LH和FSH激素的显着降低（p = 0.00）。 此外，与吗啡组相比，金雀异黄酮（p <0.05）和金雀异黄酮加吗啡在所有组中的睾酮，LH和FSH激素均显着增加（p = 0.024）[2]。 双酚A（BPA）单独处理并与金雀异黄酮联合处理对STD或HFD喂养大鼠肝脏中LC3II和PPARα蛋白表达无显着影响（P> 0.05; P> 0.05）。 与HFD组或HFD-BPA组相比，当给予大鼠染料木黄酮时，观察到肝脏中PPARγ的蛋白质表达显着降低[3]。
二、金雀异黄酮的生物活性实验方法：
1）细胞实验
通过MTT测定确定染料木黄酮的IC 50值。 简而言之，MTT测定法是比色测定法，其基于活的但不是死细胞将基于四唑鎓的化合物还原成蓝色甲product产物的能力。 将甲crystals晶体溶解在DMSO中，并在540nm下测量吸光度。 540nm处的吸光度与活细胞数成比例。 将通过MTT测定获得的lC50值与通过使用台盼蓝染料排除和通过氚化胸苷掺入DNA计数活细胞获得的lC50值进行比较[1]。
2）动物实验
小鼠-使用Balb / c雄性小鼠。金雀异黄素如下施用：在第1-30天，金雀异黄素每日一次，腹膜内注射。吗啡加金雀异黄素按如下方式给药：在第1-30天，金雀异黄素每日一次加吗啡，腹腔注射（17,18）。施用相同体积的盐水。将小鼠随机分成8组（n = 6）。 1）生理盐水组（1 mL DW /每日）; 2）吗啡处理组; 3）金雀异黄酮 1 mg / kg处理组; 4）染料木黄酮2mg / kg处理组5）金雀异黄酮 4mg / kg处理组; 6）吗啡加金雀异黄酮 1 mg / kg处理组; 7）吗啡加金雀异黄酮 2 mg / kg处理组; 8）吗啡加金雀异黄酮 4mg / kg处理组。
大鼠-使用雄性8周龄Wistar大鼠（150-180g）。适应一周后，将所有大鼠随机分为8组，每组10只，按如下方式处理35周：（1）STD组饲喂啮齿动物标准饲料（STD）; （2）STD-BPA组给予STD并给予BPA（50μg/ kg /天）; （3）STD-（BPA + G）组给予STD并给予BPA（50μg/ kg /天）加金雀异黄酮（10mg / kg /天）; （4）STD-G组给予STD并给予金雀异黄酮（10mg / kg /天）; （5）HFD组接受高脂饮食（HFD）; （6）HFD-BPA组给予HFD并给予BPA（50μg/ kg /天）; （7）STD-（BPA + G）组给予HFD并给予BPA（50μg/ kg /天）加金雀异黄酮（10mg / kg /天）; （8）HFD-G组给予HFD并给予金雀异黄酮（10mg / kg /天）。所有男性同性恋者连续治疗35周。先前已经描述了BPA（50μg/ kg /天）和染料木黄酮（10mg / kg /天）处理方法的细节：将BPA溶解在玉米油中并用三种储备溶液稀释（20,40,80和120）微克/毫升）。
综上所述：金雀异黄酮是一种有效的蛋白酪氨酸激酶 (PTK) 抑制剂，抑制 EGFR，IC50 为 0.7 μg/mL (0.6 μM)。它的靶点活性为EGFR。
参考文献：
[1]. Peterson G, et al. Genistein inhibits both estrogen and growth factor-stimulated proliferation of human breast cancer cells. Cell Growth Differ. 1996 Oct;7(10):1345-51.
[2]. Jalili C, et al. Effect of Genistein on reproductive parameter and serum nitric oxide levels in morphine-treated mice. Int J Reprod Biomed (Yazd). 2016 Feb;14(2):95-102.
[3]. Ding S, et al. Environmentally Relevant Dose of Bisphenol A Does Not Affect Lipid Metabolism and Has No Synergetic or Antagonistic Effects on Genistein's Beneficial Roles on Lipid Metabolism. PLoS One. 2016 May 12;11(5):e0155352.
相关化合物：染料木素
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