交联葡聚糖凝胶 G-75，CAS 37224-29-6，属于以葡聚糖为骨架、经环氧氯丙烷交联形成的亲水性凝胶过滤介质。其分离行为由三维交联网络中的孔径分布控制。G-75 的标称分级范围以球状蛋白计为 3×10³–8×10⁴ Da，以葡聚糖计为 1×10³–5×10⁴ Da。这个范围不是简单的分子量截断，而是流体动力学半径与孔道可及体积之间的匹配结果。
孔径与分配系数
凝胶过滤的保留由分配系数 Kav 描述：Kav = (Ve − V0)/(Vt − V0)。Ve 为溶质洗脱体积，V0 为外水体积，Vt 为总床体积。Kav=0 表示完全排阻，溶质只进入颗粒间空隙；Kav=1 表示完全渗透，溶质可进入全部孔道；0
球状蛋白与多肽
在标准水相缓冲液中，G-75 适合分离分子量约 3,000–80,000 的球状蛋白、酶、激素、多肽和蛋白片段。分子量低于 3,000 的组分进入孔内，保留体积接近 Vt，尺寸差异带来的分辨率显著下降。分子量高于 80,000 的球状蛋白被孔道完全排阻，保留体积接近 V0，无法依据尺寸进行分级。因此，G-75 的工作窗口是 3–80 kDa，排阻极限为 80 kDa。对 10–60 kDa 的蛋白混合物，该介质能提供较好的线性分级区间。
线性多糖与变性链
对于葡聚糖等线性或松散链分子，G-75 的适用区间为 1,000–50,000 Da。线性链的流体动力学半径大于同分子量球状蛋白，因此其表观尺寸更大，排阻极限对应的分子量更低。变性蛋白、糖蛋白、去污剂复合物和随机卷曲多肽的尺寸同样偏离球状模型，实际分级范围需以流体动力学半径校准。使用变性剂如尿素、盐酸胍或 SDS 时，分子构象伸展，G-75 的可用分子量区间向低值移动。对于这类样品，以球状蛋白标定的分子量范围仅作为参照，实际分离应依据标准分子量标记绘制 Kav 对 lg Mr 的校正曲线。
水相适用性与非理想作用
G-75 亲水性强，适用于水、缓冲盐溶液和含水混合溶剂。交联葡聚糖的羟基丰富，亲水表面降低蛋白质疏水吸附；凝胶骨架中少量羧基在低离子强度下对碱性蛋白表现出弱离子交换作用。提高流动相离子强度至 0.1–0.5 mol/L NaCl 可屏蔽静电作用，使分离接近纯尺寸排阻。对于芳香族或疏水性强的多肽，加入少量有机溶剂或表面活性剂可抑制疏水吸附。操作 pH 范围覆盖 2–13，化学稳定性满足常规生物化学分离。流速应控制在低压条件，防止软凝胶压缩导致孔径畸变和分辨率下降。
典型应用定位
G-75 位于 G-50 与 G-100 之间。G-50 适合约 1.5–30 kDa 的球状蛋白，G-100 覆盖约 4–150 kDa。G-75 的 3–80 kDa 窗口适合中等分子量蛋白的精细分级、脱盐、缓冲液交换、去除小分子配体与聚合体分离。脱盐时，目标蛋白分子量高于 80 kDa 或低于 3 kDa 均无法在 G-75 上获得尺寸分辨，此时应选择排阻极限更高或更低的凝胶。对于 3–80 kDa 的混合物，G-75 可在水相体系中实现按流体动力学半径递减的洗脱序列，大分子先出，小分子后出。该介质不适合非水相体系中的强疏水小分子分级，也不适合需要高流速和高机械强度的刚性色谱柱。
结论：交联葡聚糖凝胶 G-75 的标准分离范围为球状蛋白 3×10³–8×10⁴ Da，线性葡聚糖 1×10³–5×10⁴ Da。其有效分级窗口由孔径分布、分子构象和流动相条件共同决定。低于下限的分子完全渗透，高于上限的分子完全排阻，两者均不能按尺寸分离。