布立尼布的生物活性_布立尼布的实验方法
发布时间：2018-10-21 13:30:25 编辑作者：活性达人
图片：布立尼布结构式
布立尼布是一种ATP竞争性的 VEGFR2 抑制剂，IC50 值为 25 nM；可以适度抑制 VEGFR-1 和 FGFR-1，对 VEGFR2 的选择性是对 PDGFR-β 的 240 倍。
一、布立尼布的生物活性详解：
1）体外活性
布立尼布抑制VEGFR1和FGFR-1，IC50为0.38μM和0.148μM。 布立尼布对PDGFRβ，EGFR，LCK，PKCα或JAK-3不敏感，IC50均高于1900 nM。 布立尼布可抑制VEGF刺激的HUVEC的增殖，IC50为40 nM，而FGF刺激的HUVEC中为276 nM。 另一方面，布立尼布对肿瘤细胞系表现出低活性[1]。 布立尼布剂量≤20μM反常增强FGF诱导的LX-2细胞增殖，而较高的布立尼布剂量（≥30μM）抑制LX-2细胞增殖。 布立尼布对肝纤维化的抑制作用不是通过抑制TGF-β1诱导的星状细胞活化，而可能是通过抑制PDGF-BB诱导的星状细胞活化[3]。
2）体内活性
布立尼布在无胸腺小鼠的H3396异种移植物中显示出抗肿瘤活性。 在剂量为60和90 mg / kg（口服）时，布立尼布完全抑制肿瘤生长，TGI分别为85％和97％[1]。 此外，布立尼布显着抑制肝细胞癌（HCC）异种移植物中的肿瘤生长，这是由于VEGFR2的磷酸化降低。 结果显示06-0606异种移植小鼠的肿瘤重量分别为55％和13％，与对照组相比，剂量为50mg / kg和100mg / kg。 建议布立尼布有效治疗HCC [2]。 布立尼布（50mg / kg，口服）减轻小鼠体内BDL诱导的肝纤维化和星状细胞活化。 布立尼布抑制假对照动物的生长因子和生长因子受体mRNA表达，但在胆管结扎动物中表现出不同的作用[3]。
二、布立尼布的实验方法：
1）动物实验
4-6周龄的雄性小鼠每周处理3次，总共12次腹膜内（i.p.）注射150mL / kg TAA。 在TAA治疗开始时，安慰剂或布立尼布（25或50mg / kg）连续5天口服给药，周末休息。 在注射开始后4周处死动物。
2）细胞实验
使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）在LX-2细胞中测量活力。 使用每孔2,000个细胞的96孔板，将HSC在10％FBS补充的DMEM中孵育24小时，然后在无血清培养基中饥饿。 饥饿24小时后，加入不同剂量的布立尼布。 两小时后，加入5ng / mL PDGF-BB。 将细胞再孵育72小时并测量细胞活力。 每个实验重复进行三次至少四次。
3）激酶实验
含有酪氨酸激酶的重组蛋白质在Sf9细胞中使用杆状病毒表达载体系统表达为GST融合蛋白。 所有酶均储存在-80°C。 将布立尼布溶于DMSO中并用水/ 10％DMSO稀释。 VEGFR2激酶溶液由8 ng GST-VEGFR2酶，75μg/ mL底物，1μMATP和0.04μCi[γ-33P] -ATP在50μL缓冲液中组成：20 mM Tris（pH 7.0），25μg/ mL BSA，1.5mM MnCl 2,0.5mM二硫苏糖醇）。 Flk-1激酶溶液由10 ng GST-Flk-1酶，75μg/ mL底物，1μMATP和0.04μCi[γ-33P] -ATP在50μL缓冲液中组成：20 mM Tris，pH 7.0,25 μg/ mL BSA，4mM MnCl 2,0.5mM二硫苏糖醇）。 将反应物在27℃温育1小时，并用冷的三氯乙酸（TCA）终止至终浓度为15％。 将这些TCA沉淀物收集在单过滤板上并通过液体闪烁计数器定量。
综上所述：布立尼布是针对VEGFR2的ATP竞争性抑制剂，IC50为25 nM，对VEGFR-1和FGFR-1具有中等效力，但对PDGFR-β> 240倍。 它的靶点活性为EGFR,>1.9μM；FGFR1,148nM；Flk1,89nM；VEGFR1,380nM；VEGFR2,25nM。
参考文献：
[1]. Bhide RS, et al. Discovery and preclinical studies of (R)-1-(4-(4-fluoro-2-methyl-1H-indol-5-yloxy)-5- methylpyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-yloxy)propan- 2-ol (BMS-540215), an in vivo active potent VEGFR-2 inhibitor. J Med Chem, 2006, 49 (7), 2143-2146.
[2]. Huynh H, et al. Brivanib alaninate, a dual inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor and fibroblast growth factor receptor tyrosine kinases, induces growth inhibition in mouse models of human hepatocellular carcinoma. Clin Cancer Res, 2008,
[3]. Nakamura I, et al. Correction: Brivanib Attenuates Hepatic Fibrosis In Vivo and Stellate Cell Activation In Vitro by Inhibition of FGF, VEGF and PDGF Signaling. PLoS One. 2015 Nov 3;10(11):e0142355.
一、布立尼布的生物活性详解：
1）体外活性
布立尼布抑制VEGFR1和FGFR-1，IC50为0.38μM和0.148μM。 布立尼布对PDGFRβ，EGFR，LCK，PKCα或JAK-3不敏感，IC50均高于1900 nM。 布立尼布可抑制VEGF刺激的HUVEC的增殖，IC50为40 nM，而FGF刺激的HUVEC中为276 nM。 另一方面，布立尼布对肿瘤细胞系表现出低活性[1]。 布立尼布剂量≤20μM反常增强FGF诱导的LX-2细胞增殖，而较高的布立尼布剂量（≥30μM）抑制LX-2细胞增殖。 布立尼布对肝纤维化的抑制作用不是通过抑制TGF-β1诱导的星状细胞活化，而可能是通过抑制PDGF-BB诱导的星状细胞活化[3]。
2）体内活性
布立尼布在无胸腺小鼠的H3396异种移植物中显示出抗肿瘤活性。 在剂量为60和90 mg / kg（口服）时，布立尼布完全抑制肿瘤生长，TGI分别为85％和97％[1]。 此外，布立尼布显着抑制肝细胞癌（HCC）异种移植物中的肿瘤生长，这是由于VEGFR2的磷酸化降低。 结果显示06-0606异种移植小鼠的肿瘤重量分别为55％和13％，与对照组相比，剂量为50mg / kg和100mg / kg。 建议布立尼布有效治疗HCC [2]。 布立尼布（50mg / kg，口服）减轻小鼠体内BDL诱导的肝纤维化和星状细胞活化。 布立尼布抑制假对照动物的生长因子和生长因子受体mRNA表达，但在胆管结扎动物中表现出不同的作用[3]。
二、布立尼布的实验方法：
1）动物实验
4-6周龄的雄性小鼠每周处理3次，总共12次腹膜内（i.p.）注射150mL / kg TAA。 在TAA治疗开始时，安慰剂或布立尼布（25或50mg / kg）连续5天口服给药，周末休息。 在注射开始后4周处死动物。
2）细胞实验
使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）在LX-2细胞中测量活力。 使用每孔2,000个细胞的96孔板，将HSC在10％FBS补充的DMEM中孵育24小时，然后在无血清培养基中饥饿。 饥饿24小时后，加入不同剂量的布立尼布。 两小时后，加入5ng / mL PDGF-BB。 将细胞再孵育72小时并测量细胞活力。 每个实验重复进行三次至少四次。
3）激酶实验
含有酪氨酸激酶的重组蛋白质在Sf9细胞中使用杆状病毒表达载体系统表达为GST融合蛋白。 所有酶均储存在-80°C。 将布立尼布溶于DMSO中并用水/ 10％DMSO稀释。 VEGFR2激酶溶液由8 ng GST-VEGFR2酶，75μg/ mL底物，1μMATP和0.04μCi[γ-33P] -ATP在50μL缓冲液中组成：20 mM Tris（pH 7.0），25μg/ mL BSA，1.5mM MnCl 2,0.5mM二硫苏糖醇）。 Flk-1激酶溶液由10 ng GST-Flk-1酶，75μg/ mL底物，1μMATP和0.04μCi[γ-33P] -ATP在50μL缓冲液中组成：20 mM Tris，pH 7.0,25 μg/ mL BSA，4mM MnCl 2,0.5mM二硫苏糖醇）。 将反应物在27℃温育1小时，并用冷的三氯乙酸（TCA）终止至终浓度为15％。 将这些TCA沉淀物收集在单过滤板上并通过液体闪烁计数器定量。
综上所述：布立尼布是针对VEGFR2的ATP竞争性抑制剂，IC50为25 nM，对VEGFR-1和FGFR-1具有中等效力，但对PDGFR-β> 240倍。 它的靶点活性为EGFR,>1.9μM；FGFR1,148nM；Flk1,89nM；VEGFR1,380nM；VEGFR2,25nM。
参考文献：
[1]. Bhide RS, et al. Discovery and preclinical studies of (R)-1-(4-(4-fluoro-2-methyl-1H-indol-5-yloxy)-5- methylpyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazin-6-yloxy)propan- 2-ol (BMS-540215), an in vivo active potent VEGFR-2 inhibitor. J Med Chem, 2006, 49 (7), 2143-2146.
[2]. Huynh H, et al. Brivanib alaninate, a dual inhibitor of vascular endothelial growth factor receptor and fibroblast growth factor receptor tyrosine kinases, induces growth inhibition in mouse models of human hepatocellular carcinoma. Clin Cancer Res, 2008,
[3]. Nakamura I, et al. Correction: Brivanib Attenuates Hepatic Fibrosis In Vivo and Stellate Cell Activation In Vitro by Inhibition of FGF, VEGF and PDGF Signaling. PLoS One. 2015 Nov 3;10(11):e0142355.
相关化合物：布立尼布