埃克替尼的生物活性和实验方法
发布时间：2018-10-22 16:19:57 编辑作者：活性达人
图片：埃克替尼结构式
埃克替尼是一种可口服的基于喹唑啉的表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。
一、埃克替尼的生物活性详解：
1）体外活性
与埃克替尼在0.5μM孵育导致激酶活性抑制分别为91％，99％，96％，61％和61％。 埃克替尼抑制A431和BGC-823 A549，H460和KB细胞系的增殖，IC50分别为1,4.06,12.16,16.08,40.71μM。 当用88种激酶进行分析时，埃克替尼仅对EGFR及其突变体显示出有意义的抑制活性。 埃克替尼阻断人表皮样癌A431细胞系中EGFR介导的细胞内酪氨酸磷酸化（IC50 = 45 nM）并抑制肿瘤细胞增殖[1]。
2）体内活性
埃克替尼在携带多种人肿瘤来源的异种移植物的裸鼠中表现出有效的剂量依赖性抗肿瘤作用。 该药物在小鼠中的剂量高达120mg / kg /天时具有良好的耐受性，在治疗期间没有死亡或显着的体重减轻。 在A431细胞系组中，埃克替尼以25.2％，45.6％和51.5％的比率抑制肿瘤生长; A549细胞系组中有3.4％，25.9％和31.0％; H460细胞系组分别为49.4％，52.6％和67.4％，HCT8细胞系组分别为30.3％，36.4％和46.5％，分别为30,60和120 mg / kg /剂[1]。
二、埃克替尼的实验方法：
1）动物实验
小鼠：在携带A431，A549，H460和HCT8肿瘤异种移植物的小鼠中测定三剂埃克替尼（30,60和120mg / kg /剂量p.o.qd）对抗肿瘤活性和存活的影响。 在这些实验中使用紫杉醇（30mg / kg /剂量，每周一次）作为阳性对照组[1]。
2）细胞实验
将细胞（1000个/孔）接种到含有10％FBS的RPMI-1640培养基中的96孔板中，并在37℃下在5％CO 2培养箱中生长。 24小时后，用埃克替尼在0,0.78,1.56,3.125,6.25,12.5或25μM处理细胞96小时。 通过从第4天的平均吸光度值减去第0天的平均吸光度值来计算细胞增殖[1]。
3）激酶实验
在体外激酶测定中，将2.4 ng /μLEGFR蛋白与32 ng /μLCrk在含有1μM冷ATP和1μCi32P-γ-ATP的25μL激酶反应缓冲液中混合。 将混合物与埃克替尼在0,0.5,2.5,12.5或62.5nM下在冰上温育10分钟，然后在30℃温育20分钟。 在SDS样品缓冲液中于100℃淬灭4分钟后，通过在10％SDS-PAGE凝胶中电泳分离蛋白质混合物。 然后暴露干燥的凝胶以检测放射性。 量化由软件[1]进行。
综上所述：埃克替尼 (BPI-2009)是有效，选择性的 EGFR 抑制剂，IC50 值为5 nM；也抑制突变型EGFRL858R，EGFRL858R/T790M，EGFRT790M 和 EGFRL861Q。它的靶点活性为EGFR,5nM。
参考文献：
[1]. Tan F, et al. Icotinib (BPI-2009H), a novel EGFR tyrosine kinase inhibitor, displays potent efficacy in preclinical studies. Lung Cancer. 2012 May;76(2):177-82.
一、埃克替尼的生物活性详解：
1）体外活性
与埃克替尼在0.5μM孵育导致激酶活性抑制分别为91％，99％，96％，61％和61％。 埃克替尼抑制A431和BGC-823 A549，H460和KB细胞系的增殖，IC50分别为1,4.06,12.16,16.08,40.71μM。 当用88种激酶进行分析时，埃克替尼仅对EGFR及其突变体显示出有意义的抑制活性。 埃克替尼阻断人表皮样癌A431细胞系中EGFR介导的细胞内酪氨酸磷酸化（IC50 = 45 nM）并抑制肿瘤细胞增殖[1]。
2）体内活性
埃克替尼在携带多种人肿瘤来源的异种移植物的裸鼠中表现出有效的剂量依赖性抗肿瘤作用。 该药物在小鼠中的剂量高达120mg / kg /天时具有良好的耐受性，在治疗期间没有死亡或显着的体重减轻。 在A431细胞系组中，埃克替尼以25.2％，45.6％和51.5％的比率抑制肿瘤生长; A549细胞系组中有3.4％，25.9％和31.0％; H460细胞系组分别为49.4％，52.6％和67.4％，HCT8细胞系组分别为30.3％，36.4％和46.5％，分别为30,60和120 mg / kg /剂[1]。
二、埃克替尼的实验方法：
1）动物实验
小鼠：在携带A431，A549，H460和HCT8肿瘤异种移植物的小鼠中测定三剂埃克替尼（30,60和120mg / kg /剂量p.o.qd）对抗肿瘤活性和存活的影响。 在这些实验中使用紫杉醇（30mg / kg /剂量，每周一次）作为阳性对照组[1]。
2）细胞实验
将细胞（1000个/孔）接种到含有10％FBS的RPMI-1640培养基中的96孔板中，并在37℃下在5％CO 2培养箱中生长。 24小时后，用埃克替尼在0,0.78,1.56,3.125,6.25,12.5或25μM处理细胞96小时。 通过从第4天的平均吸光度值减去第0天的平均吸光度值来计算细胞增殖[1]。
3）激酶实验
在体外激酶测定中，将2.4 ng /μLEGFR蛋白与32 ng /μLCrk在含有1μM冷ATP和1μCi32P-γ-ATP的25μL激酶反应缓冲液中混合。 将混合物与埃克替尼在0,0.5,2.5,12.5或62.5nM下在冰上温育10分钟，然后在30℃温育20分钟。 在SDS样品缓冲液中于100℃淬灭4分钟后，通过在10％SDS-PAGE凝胶中电泳分离蛋白质混合物。 然后暴露干燥的凝胶以检测放射性。 量化由软件[1]进行。
综上所述：埃克替尼 (BPI-2009)是有效，选择性的 EGFR 抑制剂，IC50 值为5 nM；也抑制突变型EGFRL858R，EGFRL858R/T790M，EGFRT790M 和 EGFRL861Q。它的靶点活性为EGFR,5nM。
参考文献：
[1]. Tan F, et al. Icotinib (BPI-2009H), a novel EGFR tyrosine kinase inhibitor, displays potent efficacy in preclinical studies. Lung Cancer. 2012 May;76(2):177-82.
相关化合物：埃克替尼