伊马替尼_作用_生物活性_实验方法
发布时间：2018-10-27 18:13:03 编辑作者：活性达人
图片：伊马替尼结构式
伊马替尼是酪氨酸激酶抑制剂和抗肿瘤药物，其抑制由慢性髓性白血病和急性淋巴细胞白血病中的染色体重排产生的BCR-ABL激酶，以及在胃肠道间质肿瘤中过表达的PDG衍生的酪氨酸激酶。
一、伊马替尼的生物活性详解：
1）体外活性
伊马替尼（STI571）抑制c-Kit自身磷酸化，MAPK活化和Akt活化而不改变c-kit，MAPK或Akt的总蛋白水平。对这些影响产生50％抑制的浓度约为100 nM [1]。伊马替尼（STI571）对引起慢性粒细胞白血病的激酶Bcr-Abl非常有效（体外IC50为25 nM）。伊马替尼还有效抑制Kit（体外IC50,410 nM）和PDGFR（体外IC50,380 nM）[2]。伊马替尼（STI571）是v-Abl，c-Kit的多靶点抑制剂，抑制Bcr / Abl，v-Abl，Tel / Abl，天然PDGFβ受体和c-Kit，但不抑制Src家族激酶，c-Fms，Flt3，EGFR或多种其他酪氨酸激酶。伊马替尼抑制表达Bcr / Abl，Tel / Abl，Tel /PDGFβR和Tel / Arg的Ba / F3细胞的酪氨酸磷酸化和细胞生长，每种情况下IC50约为0.5μM，但对未转化的Ba / F3没有影响。细胞生长在IL-3或通过Tel / JAK2转化的Ba / F3细胞[3]。伊马替尼（STI571）的IC50s是v-Abl，c-Kit和BON-1和H727细胞的多靶点抑制剂，暴露48小时后分别为32.4和32.8μM[4]。
2）体内活性
在硫代磷酸酯反义寡脱氧核苷酸（PS-ASODN）组中，肿瘤生长受到59.437％的抑制，这显着高于伊马替尼（STI571）是v-Abl，c-Kit和组的多靶点抑制剂（11.071％） ）和脂质体阴性对照组（2.759％）。 与伊马替尼组（1.838±0.241），脂质体阴性对照组（2.013±0.273）和生理盐水组（2.004±0.163）相比，PS-ASODN组端粒酶活性显着降低（P <0.01）（0.689±0.158）[5]。 伊马替尼（25mg / kg /天，口服）抑制子宫内膜异位组织的生长并减少大鼠模型中卵巢卵泡的数量。 伊马替尼通过其对血管生成和细胞增殖的抑制作用有效地治疗实验性子宫内膜异位症[6]。
二、伊马替尼的实验方法：
1）动物实验
小鼠[5]-40荷瘤SCID小鼠被随机分成四组（每组10只小鼠）：对PS-反义组（5μM，每只小鼠通过瘤内注射接收0.2mL的每日一次）;伊马替尼组（0.1 mg / g体重）;脂质体阴性对照组（0.01 mL / g）;和生理盐水组（0.01mL / g）。每组中的小鼠在植入后第7天至第28天每天一次通过肿瘤内注射接受相关治疗。 28天后，处死小鼠，分别用电子秤和游标卡尺测量肿瘤重量，最长和最短直径。计算肿瘤生长的抑制。
大鼠[6]-使用成年雌性Wistar-Albino大鼠（220-240g）。在第一次外科手术后21天，对大鼠进行第二次剖腹手术以评估子宫内膜异位症的发生。二十四只大鼠已目视确认子宫内膜异位的植入物和被随机分为三组，分别接受伊马替尼（25毫克/千克/天，口服），阿那曲唑（0.004毫克/天，口服），或生理盐水（0.1毫升，腹膜内）14天。
2）细胞实验
将BON-1细胞（每孔7,500个）和NCI-H727细胞（每孔5,000个）接种到平底96孔板中，一式三份，并使其在10％胎牛血清补充的DMEM或RPMI 1640完全培养基中粘附过夜。 ， 分别; 然后将培养基更换为含有连续稀释的伊马替尼的无血清培养基（阴性对照）或无血清培养基。 48小时后（对照培养物未达到汇合），代谢活性细胞的数量通过3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物测定法测定，并且吸光度在 Packard Spectra酶标仪，540 nm。 计算生长抑制。 实验一式三份进行[4]。
3）激酶实验
PDGF受体激酶活性：PDGF受体从BALB / c 3T3细胞提取物中免疫沉淀，其具有针对鼠PDGF受体的兔抗血清，在冰上2小时。 蛋白A-Sepharose珠用于收集抗原 - 抗体复合物。 用TNET（50mM Tris，pH 7.5,140mM NaCl，5mM EDTA，1％Triton X-100）洗涤免疫沉淀物两次，用TNE（50mM Tris，pH 7.5,140mM EDTA）洗涤一次，并用 激酶缓冲液（20mM Tris，pH 7.5,10mM MgCl 2）。 在4℃下用PDGF（50ng / mL）刺激10分钟后，向反应混合物中加入不同浓度的药物。 通过与10μCi[7-33P] -ATP和1μMATP在4℃温育10分钟来确定PDGF受体激酶活性。 通过SDS-PAGE在7.5％凝胶上分离免疫复合物。
综上所述：伊马替尼是一种 c-Kit，Bcr-Abl 和 PDGFR 酪氨酸激酶抑制剂，抑制SLF依赖性的c-Kitwt 激活，IC50 为 100 nM。它的靶点活性为c-Kit,100nM；PDGFR,100nM；v-Abl,600nM。
参考文献：
[1]. Heinrich MC, et al. Inhibition of c-kit receptor tyrosine kinase activity by STI 571, a selective tyrosine kinase inhibitor. Blood. 2000 Aug 1;96(3):925-32.
[2]. Guida T, et al. Sorafenib inhibits imatinib-resistant KIT and platelet-derived growth factor receptor beta gatekeeper mutants. Clin Cancer Res. 2007 Jun 1;13(11):3363-9.
[3]. Okuda K, et al. ARG tyrosine kinase activity is inhibited by STI571.Blood. 2001 Apr 15;97(8):2440-8.
[4]. Yao JC, et al. Clinical and in vitro studies of imatinib in advanced carcinoid tumors. Clin Cancer Res. 2007 Jan 1;13(1):234-40.
[5]. Sun XC, et al. Depletion of telomerase RNA inhibits growth of gastrointestinal tumors transplanted in mice. World J Gastroenterol. 2013 Apr 21;19(15):2340-7.
[6]. Yildiz C, et al. Effect of imatinib on growth of experimental endometriosis in rats. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2016 Feb;197:159-63.
一、伊马替尼的生物活性详解：
1）体外活性
伊马替尼（STI571）抑制c-Kit自身磷酸化，MAPK活化和Akt活化而不改变c-kit，MAPK或Akt的总蛋白水平。对这些影响产生50％抑制的浓度约为100 nM [1]。伊马替尼（STI571）对引起慢性粒细胞白血病的激酶Bcr-Abl非常有效（体外IC50为25 nM）。伊马替尼还有效抑制Kit（体外IC50,410 nM）和PDGFR（体外IC50,380 nM）[2]。伊马替尼（STI571）是v-Abl，c-Kit的多靶点抑制剂，抑制Bcr / Abl，v-Abl，Tel / Abl，天然PDGFβ受体和c-Kit，但不抑制Src家族激酶，c-Fms，Flt3，EGFR或多种其他酪氨酸激酶。伊马替尼抑制表达Bcr / Abl，Tel / Abl，Tel /PDGFβR和Tel / Arg的Ba / F3细胞的酪氨酸磷酸化和细胞生长，每种情况下IC50约为0.5μM，但对未转化的Ba / F3没有影响。细胞生长在IL-3或通过Tel / JAK2转化的Ba / F3细胞[3]。伊马替尼（STI571）的IC50s是v-Abl，c-Kit和BON-1和H727细胞的多靶点抑制剂，暴露48小时后分别为32.4和32.8μM[4]。
2）体内活性
在硫代磷酸酯反义寡脱氧核苷酸（PS-ASODN）组中，肿瘤生长受到59.437％的抑制，这显着高于伊马替尼（STI571）是v-Abl，c-Kit和组的多靶点抑制剂（11.071％） ）和脂质体阴性对照组（2.759％）。 与伊马替尼组（1.838±0.241），脂质体阴性对照组（2.013±0.273）和生理盐水组（2.004±0.163）相比，PS-ASODN组端粒酶活性显着降低（P <0.01）（0.689±0.158）[5]。 伊马替尼（25mg / kg /天，口服）抑制子宫内膜异位组织的生长并减少大鼠模型中卵巢卵泡的数量。 伊马替尼通过其对血管生成和细胞增殖的抑制作用有效地治疗实验性子宫内膜异位症[6]。
二、伊马替尼的实验方法：
1）动物实验
小鼠[5]-40荷瘤SCID小鼠被随机分成四组（每组10只小鼠）：对PS-反义组（5μM，每只小鼠通过瘤内注射接收0.2mL的每日一次）;伊马替尼组（0.1 mg / g体重）;脂质体阴性对照组（0.01 mL / g）;和生理盐水组（0.01mL / g）。每组中的小鼠在植入后第7天至第28天每天一次通过肿瘤内注射接受相关治疗。 28天后，处死小鼠，分别用电子秤和游标卡尺测量肿瘤重量，最长和最短直径。计算肿瘤生长的抑制。
大鼠[6]-使用成年雌性Wistar-Albino大鼠（220-240g）。在第一次外科手术后21天，对大鼠进行第二次剖腹手术以评估子宫内膜异位症的发生。二十四只大鼠已目视确认子宫内膜异位的植入物和被随机分为三组，分别接受伊马替尼（25毫克/千克/天，口服），阿那曲唑（0.004毫克/天，口服），或生理盐水（0.1毫升，腹膜内）14天。
2）细胞实验
将BON-1细胞（每孔7,500个）和NCI-H727细胞（每孔5,000个）接种到平底96孔板中，一式三份，并使其在10％胎牛血清补充的DMEM或RPMI 1640完全培养基中粘附过夜。 ， 分别; 然后将培养基更换为含有连续稀释的伊马替尼的无血清培养基（阴性对照）或无血清培养基。 48小时后（对照培养物未达到汇合），代谢活性细胞的数量通过3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化物测定法测定，并且吸光度在 Packard Spectra酶标仪，540 nm。 计算生长抑制。 实验一式三份进行[4]。
3）激酶实验
PDGF受体激酶活性：PDGF受体从BALB / c 3T3细胞提取物中免疫沉淀，其具有针对鼠PDGF受体的兔抗血清，在冰上2小时。 蛋白A-Sepharose珠用于收集抗原 - 抗体复合物。 用TNET（50mM Tris，pH 7.5,140mM NaCl，5mM EDTA，1％Triton X-100）洗涤免疫沉淀物两次，用TNE（50mM Tris，pH 7.5,140mM EDTA）洗涤一次，并用 激酶缓冲液（20mM Tris，pH 7.5,10mM MgCl 2）。 在4℃下用PDGF（50ng / mL）刺激10分钟后，向反应混合物中加入不同浓度的药物。 通过与10μCi[7-33P] -ATP和1μMATP在4℃温育10分钟来确定PDGF受体激酶活性。 通过SDS-PAGE在7.5％凝胶上分离免疫复合物。
综上所述：伊马替尼是一种 c-Kit，Bcr-Abl 和 PDGFR 酪氨酸激酶抑制剂，抑制SLF依赖性的c-Kitwt 激活，IC50 为 100 nM。它的靶点活性为c-Kit,100nM；PDGFR,100nM；v-Abl,600nM。
参考文献：
[1]. Heinrich MC, et al. Inhibition of c-kit receptor tyrosine kinase activity by STI 571, a selective tyrosine kinase inhibitor. Blood. 2000 Aug 1;96(3):925-32.
[2]. Guida T, et al. Sorafenib inhibits imatinib-resistant KIT and platelet-derived growth factor receptor beta gatekeeper mutants. Clin Cancer Res. 2007 Jun 1;13(11):3363-9.
[3]. Okuda K, et al. ARG tyrosine kinase activity is inhibited by STI571.Blood. 2001 Apr 15;97(8):2440-8.
[4]. Yao JC, et al. Clinical and in vitro studies of imatinib in advanced carcinoid tumors. Clin Cancer Res. 2007 Jan 1;13(1):234-40.
[5]. Sun XC, et al. Depletion of telomerase RNA inhibits growth of gastrointestinal tumors transplanted in mice. World J Gastroenterol. 2013 Apr 21;19(15):2340-7.
[6]. Yildiz C, et al. Effect of imatinib on growth of experimental endometriosis in rats. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 2016 Feb;197:159-63.
相关化合物：伊马替尼
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