地法替尼 _作用_生物活性_实验方法

地法替尼是一种口服生物可利用的小分子粘着斑激酶（FAK）抑制剂，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。

一、地法替尼的生物活性详解：
1）体外活性
地法替尼以时间和剂量依赖性方式抑制Tyr397位点的FAK磷酸化。地法替尼和紫杉醇的组合显着降低增殖并增加细胞凋亡，导致肿瘤重量减少92.7％至97.9％。RPPA数据显示地法替尼降低紫杉烷抗性细胞系中AKT和YB-1的水平。在所有细胞系中，地法替尼以剂量依赖性方式统计显着抑制pFAK（Tyr397）的表达。地法替尼在3小时内抑制pFAK（Tyr397）的表达，48小时后逐渐恢复表达[1]。

2）体内活性
地法替尼剂量为25mg/kg，每天两次或更高，在3小时时统计学上显着抑制pFAK（Tyr397），24小时后表达恢复。因此，选择每天两次以25mg/kg施用地法替尼作为后续治疗实验的给药方案。对于治疗实验，将腹膜腔内携带HeyA8肿瘤的雌性裸鼠随机分成4组（每组n=10）：1）每日口服两次，每周腹膜内注射磷酸盐缓冲盐水（对照）;2）地法替尼25mg/kg每日口服两次;3）每周腹膜内注射PTX;4）地法替尼每天口服两次25mg/kg，每周腹膜内注射PTX。在HeyA8模型中通过PTX单一疗法使肿瘤重量减少87.4％，并且联合治疗导致最大的肿瘤重量减少，减少97.9％（与PTX相比P=0.05）。在SKOV3ip1模型中，与PTX相比，联合组中观察到肿瘤重量减少92.7％（P<0.001）[1]。

二、地法替尼的实验方法：
1）动物实验
小鼠[1]-为了确定地法替尼的抗肿瘤作用，腹膜内注射SKOV3ip1，SKOV3-TR，HeyA8和HeyA8-MDR细胞。在肿瘤细胞注射后一周，将小鼠随机分配到4组10只小鼠（对照组，单独的PTX，单独的地法替尼和具有地法替尼的PTX）;在注射后3-4周开始治疗。每周腹腔注射2mg/kg（SKOV3ip1和SKOV3-TR）或2.5mg/kg（HeyA8和HeyA8-MDR）的PTX;每天口服两次25mg/kg的地法替尼。对照小鼠每周一次腹膜内接受HBSS，并且每天口服两次载体。每天监测小鼠的治疗副作用，并在第35天（SKOV3ip1或SKOV3-TR），第28天（HeyA8或HeyA8-MDR）或当任何小鼠看起来垂死时被杀死。记录总体重，肿瘤发生率和质量以及肿瘤结节的数量。将肿瘤固定在福尔马林中或嵌入石蜡中或在液氮中以最佳切割温度（OCT）化合物快速冷冻。

2）细胞实验
用递增浓度的VS-6063处理卵巢癌细胞96小时，然后进行MTT测定。结果通过一式三份实验确认。

综上所述：地法替尼是一种新型FAK抑制剂，抑制FAK在Tyr397位点磷酸化，这种作用具有时间和剂量依赖性。它的靶点活性为FAK。

参考文献：
[1]. Kang Y, et al. Role of focal adhesion kinase in regulating YB-1-mediated paclitaxel resistance in ovarian cancer. J Natl Cancer Inst. 2013 Oct 2;105(19):1485-95.