舒尼替尼的作用和生物活性
发布时间：2018-11-01 17:10:58 编辑作者：活性达人
图片：舒尼替尼结构式
舒尼替尼是一种癌症药物，可以干扰体内癌细胞的生长和扩散。舒尼替尼用于治疗胃，肠，食道，胰腺或肾脏的某些类型的晚期或进行性肿瘤。那么舒尼替尼的生物活性是什么？如何做实验呢？简单来说，舒尼替尼是一种多靶点RTK抑制剂，靶向PDGFRβ和VEGFR2（Flk-1），IC50为2nM和80nM，并且还抑制c-Kit。下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍舒尼替尼的生物活性：
1）体外活性
舒尼替尼抑制野生型FLT3-ITD，FLT3-Asp835和FLT3磷酸化，IC50分别为50nM，30nM和250nM。舒尼替尼抑制OC1-AML5和MV4;11细胞的增殖，IC50分别为14nM和8nM，并以剂量依赖的方式诱导细胞凋亡。舒尼替尼能够有效抑制FLT-3和Kit。对于过表达PDGFRα或PDGFRβ的NIH-3T3细胞，舒尼替尼抑制VEGF对其诱导的增殖，IC50分别为69nM和39nM。
舒尼替尼是PDGFRβ（Ki：8nM）和VEGFR2(Flk1)（Ki：9nM）有效的ATP竞争性抑制剂。与FGFR-1，EGFR，Cdk2，Met，IGFR-1，Abl，和src相比，舒尼替尼作用于VEGFR2和PDGFR的选择性要高出10倍。在血清饥饿的表达PDGFRβ或VEGFR2的NIH-3T3细胞中，舒尼替尼抑制VEGF依赖性VEGFR2磷酸化和PDGF依赖性PDGFRβ磷酸化，IC50均为10nM。
2）体内活性
在FLT3-ITD骨髓移植模型中，舒尼替尼（每天20mg/kg）对皮下MV4;11(FLT3-ITD)异种移植物的生长具有明显抑制作用，并延长生存。与实质性，选择性抑制VEGFR2或PDGFR在体内的磷酸化和信号传导一致，舒尼替尼（每天20-80mg/kg）对各种肿瘤异种移植模型，包括HT-29，Colo205，A431，SF763T，C6，H-460，A375或MDA-MB-435表现出广泛有效的剂量依赖性抗肿瘤活性。
舒尼替尼（每天80mg/kg）给药21天，8只小鼠中有6只的肿瘤完全消退，且在治疗结束后的110天的观察期内肿瘤没有再生。尽管不能完全恢复到第一轮治疗的情况，但在第二轮使用舒尼替尼治疗仍然能够有效抗肿瘤。舒尼替尼治疗可使肿瘤MVD明显下降，如在SF763T神经胶质瘤中可减少~40%。尽管肿瘤没有减小，SU11248治疗还是能够完全抑制表达荧光素酶的PC-3M异种移植的肿瘤生长。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
针对小鼠[2]-使用雌性nu/nu小鼠（8-12周龄，25克）。简而言之，皮下植入3-5×106个肿瘤细胞。在第0天进入小鼠的后腹侧区域。一旦肿瘤达到指定的平均大小，开始口服施用SU11248作为羧甲基纤维素悬浮液或作为柠檬酸盐缓冲（pH3.5）溶液的荷瘤小鼠的每日治疗。基于每周两次的肿瘤体积测量来评估肿瘤生长。通常，当载体处理的动物中的肿瘤达到1000mm3的平均大小或当判断肿瘤对动物的健康有不利影响时，终止研究。
如果是大鼠[4]-使用成年雄性Wistar大鼠（325-349g）。为了验证延时成像方法评估给定药物治疗的抗血管生成作用的能力，进行了两项药物研究。在第一项研究中，从成年雄性Wistar大鼠收获肠系膜窗，并根据两个实验组培养3天：1）10％血清（n=8只组织来自4只大鼠），和2）10％血清+舒尼替尼（5μM;n=来自4只大鼠的8个组织）。
2）细胞实验
在加入舒尼替尼和FL（50ng/mL;仅FLT3-WT细胞）之前，将细胞在含有0.1％FBS的培养基中饥饿过夜。使用AlamarBlue测定法或台盼蓝细胞活力测定法在培养48小时后测量增殖。在通过蛋白质印迹法加入舒尼替尼后24小时测量细胞凋亡，以检测聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）或胱天蛋白酶-3水平的切割。
3）激酶实验
生化酪氨酸激酶测定：使用含有RTK的完整细胞质结构域的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白测定舒尼替尼对VEGFR2（Flk-1）和PDGFRβ的IC50值。用于定量VEGFR2（Flk-1）和PDGFRβ的反式磷酸化活性的生化酪氨酸激酶测定在96孔微量滴定板中进行，所述96孔微量滴定板预涂覆（在PBS中20μg/孔;在4℃温育过夜），与肽底物聚-Glu，Tyr（4：1）。通过在PBS中添加1-5％（w/v）BSA来阻断过量的蛋白质结合位点。纯化的GST-融合蛋白在杆状病毒感染的昆虫细胞中产生。
然后将GST-VEGFR2和GST-PDGFRβ加入到由100mMHEPES，50mMNaCl，40μMNaVO4和0.02％（w/v）BSA组成的2x浓度激酶稀释缓冲液中的微量滴定孔中。GST-VEGFR2或GST-PDGFRβ的最终酶浓度为50ng/mL。随后将25μL稀释的舒尼替尼加入每个反应孔中以产生适合于每种酶的一系列抑制剂浓度。通过在MnCl2溶液中加入不同浓度的ATP引发激酶反应，使得最终的ATP浓度跨越酶的Km，并且MnCl2的最终浓度为10mM。将板在室温下温育5-15分钟，然后加入EDTA终止反应。
然后用TBST将板洗涤三次。将兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗血清以1：10,000稀释度加入到含有0.5％（w/v）BSA，0.025％（w/v）脱脂奶粉和100μMNaVO4的TBST中，并在37°温育1小时。C。然后将板用TBST洗涤三次，接着加入与辣根过氧化物酶缀合的山羊抗兔抗血清（在TBST中1：10,000稀释）。将板在37℃温育1小时，然后用TBST洗涤三次。在加入2,2'-连氮基-二-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐]作为底物后，定量每孔中磷酸酪氨酸的量。
今天介绍了舒尼替尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。小编给您做一个总结：舒尼替尼是一种多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂，抑制VEGFR2和PDGFRβ的IC50分别为80nM和2nM。它的靶点活性为c-Kit，FLT3，PDGFRβ,2nM，VEGFR2,80nM。
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参考文献：
[1]. Sun L, et al. Discovery of 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2- dihydroindol-(3Z)-ylidenemethyl]-2,4- dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid (2-diethylaminoethyl)amide, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial and platelet-derived growth factor r
[2]. Mendel DB, et al. In vivo antitumor activity of SU11248, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor receptors: determination of a pharmacokinetic/pharmacodynamic relationship. Clin Can
[3]. O'Farrell AM, et al. SU11248 is a novel FLT3 tyrosine kinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo. Blood. 2003 May 1;101(9):3597-605.
[4]. Azimi MS, et al. An ex vivo model for anti-angiogenic drug testing on intact microvascular networks. PLoS One. 2015 Mar 5;10(3):e0119227.
首先我们介绍舒尼替尼的生物活性：
1）体外活性
舒尼替尼抑制野生型FLT3-ITD，FLT3-Asp835和FLT3磷酸化，IC50分别为50nM，30nM和250nM。舒尼替尼抑制OC1-AML5和MV4;11细胞的增殖，IC50分别为14nM和8nM，并以剂量依赖的方式诱导细胞凋亡。舒尼替尼能够有效抑制FLT-3和Kit。对于过表达PDGFRα或PDGFRβ的NIH-3T3细胞，舒尼替尼抑制VEGF对其诱导的增殖，IC50分别为69nM和39nM。
舒尼替尼是PDGFRβ（Ki：8nM）和VEGFR2(Flk1)（Ki：9nM）有效的ATP竞争性抑制剂。与FGFR-1，EGFR，Cdk2，Met，IGFR-1，Abl，和src相比，舒尼替尼作用于VEGFR2和PDGFR的选择性要高出10倍。在血清饥饿的表达PDGFRβ或VEGFR2的NIH-3T3细胞中，舒尼替尼抑制VEGF依赖性VEGFR2磷酸化和PDGF依赖性PDGFRβ磷酸化，IC50均为10nM。
2）体内活性
在FLT3-ITD骨髓移植模型中，舒尼替尼（每天20mg/kg）对皮下MV4;11(FLT3-ITD)异种移植物的生长具有明显抑制作用，并延长生存。与实质性，选择性抑制VEGFR2或PDGFR在体内的磷酸化和信号传导一致，舒尼替尼（每天20-80mg/kg）对各种肿瘤异种移植模型，包括HT-29，Colo205，A431，SF763T，C6，H-460，A375或MDA-MB-435表现出广泛有效的剂量依赖性抗肿瘤活性。
舒尼替尼（每天80mg/kg）给药21天，8只小鼠中有6只的肿瘤完全消退，且在治疗结束后的110天的观察期内肿瘤没有再生。尽管不能完全恢复到第一轮治疗的情况，但在第二轮使用舒尼替尼治疗仍然能够有效抗肿瘤。舒尼替尼治疗可使肿瘤MVD明显下降，如在SF763T神经胶质瘤中可减少~40%。尽管肿瘤没有减小，SU11248治疗还是能够完全抑制表达荧光素酶的PC-3M异种移植的肿瘤生长。
我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）动物实验
针对小鼠[2]-使用雌性nu/nu小鼠（8-12周龄，25克）。简而言之，皮下植入3-5×106个肿瘤细胞。在第0天进入小鼠的后腹侧区域。一旦肿瘤达到指定的平均大小，开始口服施用SU11248作为羧甲基纤维素悬浮液或作为柠檬酸盐缓冲（pH3.5）溶液的荷瘤小鼠的每日治疗。基于每周两次的肿瘤体积测量来评估肿瘤生长。通常，当载体处理的动物中的肿瘤达到1000mm3的平均大小或当判断肿瘤对动物的健康有不利影响时，终止研究。
如果是大鼠[4]-使用成年雄性Wistar大鼠（325-349g）。为了验证延时成像方法评估给定药物治疗的抗血管生成作用的能力，进行了两项药物研究。在第一项研究中，从成年雄性Wistar大鼠收获肠系膜窗，并根据两个实验组培养3天：1）10％血清（n=8只组织来自4只大鼠），和2）10％血清+舒尼替尼（5μM;n=来自4只大鼠的8个组织）。
2）细胞实验
在加入舒尼替尼和FL（50ng/mL;仅FLT3-WT细胞）之前，将细胞在含有0.1％FBS的培养基中饥饿过夜。使用AlamarBlue测定法或台盼蓝细胞活力测定法在培养48小时后测量增殖。在通过蛋白质印迹法加入舒尼替尼后24小时测量细胞凋亡，以检测聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）或胱天蛋白酶-3水平的切割。
3）激酶实验
生化酪氨酸激酶测定：使用含有RTK的完整细胞质结构域的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白测定舒尼替尼对VEGFR2（Flk-1）和PDGFRβ的IC50值。用于定量VEGFR2（Flk-1）和PDGFRβ的反式磷酸化活性的生化酪氨酸激酶测定在96孔微量滴定板中进行，所述96孔微量滴定板预涂覆（在PBS中20μg/孔;在4℃温育过夜），与肽底物聚-Glu，Tyr（4：1）。通过在PBS中添加1-5％（w/v）BSA来阻断过量的蛋白质结合位点。纯化的GST-融合蛋白在杆状病毒感染的昆虫细胞中产生。
然后将GST-VEGFR2和GST-PDGFRβ加入到由100mMHEPES，50mMNaCl，40μMNaVO4和0.02％（w/v）BSA组成的2x浓度激酶稀释缓冲液中的微量滴定孔中。GST-VEGFR2或GST-PDGFRβ的最终酶浓度为50ng/mL。随后将25μL稀释的舒尼替尼加入每个反应孔中以产生适合于每种酶的一系列抑制剂浓度。通过在MnCl2溶液中加入不同浓度的ATP引发激酶反应，使得最终的ATP浓度跨越酶的Km，并且MnCl2的最终浓度为10mM。将板在室温下温育5-15分钟，然后加入EDTA终止反应。
然后用TBST将板洗涤三次。将兔多克隆抗磷酸酪氨酸抗血清以1：10,000稀释度加入到含有0.5％（w/v）BSA，0.025％（w/v）脱脂奶粉和100μMNaVO4的TBST中，并在37°温育1小时。C。然后将板用TBST洗涤三次，接着加入与辣根过氧化物酶缀合的山羊抗兔抗血清（在TBST中1：10,000稀释）。将板在37℃温育1小时，然后用TBST洗涤三次。在加入2,2'-连氮基-二-[3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐]作为底物后，定量每孔中磷酸酪氨酸的量。
今天介绍了舒尼替尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。小编给您做一个总结：舒尼替尼是一种多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂，抑制VEGFR2和PDGFRβ的IC50分别为80nM和2nM。它的靶点活性为c-Kit，FLT3，PDGFRβ,2nM，VEGFR2,80nM。
您可能想了解更多的生物活性的知识。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Sun L, et al. Discovery of 5-[5-fluoro-2-oxo-1,2- dihydroindol-(3Z)-ylidenemethyl]-2,4- dimethyl-1H-pyrrole-3-carboxylic acid (2-diethylaminoethyl)amide, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial and platelet-derived growth factor r
[2]. Mendel DB, et al. In vivo antitumor activity of SU11248, a novel tyrosine kinase inhibitor targeting vascular endothelial growth factor and platelet-derived growth factor receptors: determination of a pharmacokinetic/pharmacodynamic relationship. Clin Can
[3]. O'Farrell AM, et al. SU11248 is a novel FLT3 tyrosine kinase inhibitor with potent activity in vitro and in vivo. Blood. 2003 May 1;101(9):3597-605.
[4]. Azimi MS, et al. An ex vivo model for anti-angiogenic drug testing on intact microvascular networks. PLoS One. 2015 Mar 5;10(3):e0119227.
相关化合物：舒尼替尼
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