| 描述 |
Ampkinone 是一种间接的 AMP 激活蛋白激酶 (AMPK) 激活剂。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
AMPK
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| 体外研究 |
Ampkinone通过在各种细胞系中间接激活AMPK来刺激AMPK的磷酸化。 Ampkinone介导的AMPK活化需要LKB1的活性,并导致肌肉细胞中葡萄糖摄取增加[1]。
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| 体内研究 |
Ampkinone处理的DIO小鼠显着降低总体重和总脂肪量。组织学检查和脂质参数测量表明,Ampkinone有效改善DIO小鼠模型中的代谢异常[1]。
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| 激酶实验 |
使用合成的SAMS肽底物和[γ-32P] ATP测量总AMPK活性。简言之，将500μg蛋白质提取物与抗AMPK-α1和α2抗体在4℃温育2小时。加入蛋白A / G琼脂糖和琼脂糖，将混合物在4℃温育3小时。用RIPA缓冲液洗涤样品三次后，在含有20mM HEPES-NaOH（pH7.0），0.4mM二硫苏糖醇和0.01％Brij-35的AMPK反应缓冲液中评估活性，有或没有300μMAMP。每次测定将免疫复合物加入23μL反应缓冲液中，然后加入7μLSMSS底物肽（HMRSAMSGLHLVKRR，100μM终浓度）和10μLATP混合物（1μCi/μL的等分试样：90μL的75mM加入氯化镁，在20mM MOPS，pH7.2,25mMβ-甘油磷酸盐，5mM EGTA，1mM原钒酸钠和1mM二硫苏糖醇中的500μM未标记的ATP，并将混合物在30℃温育15分钟。将35μL点在P81纸的中心后，用0.75％磷酸洗涤纸三次，用丙酮洗涤一次5分钟。使用闪烁计数器[1]读取样品。
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| 动物实验 |
使用小鼠[1] C57BL / 6J小鼠并将其单独饲养在维持在25℃，12 / 12h光/暗时间表的房间中。对于饮食诱导的肥胖（DIO）小鼠，将4周龄雄性C57BL / 6J小鼠随意喂食高脂肪饮食（HFD，60％卡路里的脂肪），持续8周。聚乙二醇（PEG400）或载体中的安体酮以10mg / kg体重每天皮下施用1个月。每3天测量一次体重和食物摄入量。给所有动物进行胰岛素耐量试验（ITT）并在30天时处死。测量肝脏重量和脂肪量，切片，并用油红O和H＆E染色。
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| 参考文献 |
[1]. Oh S, et al. Antidiabetic and antiobesity effects of Ampkinone (6f), a novel small molecule activator of AMP-activated protein kinase. J Med Chem. 2010 Oct 28;53(20):7405-13.
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