| 描述 |
SR144528 是一个有效且选择性的 CB2 受体拮抗剂,其 Ki 值为 0.6 nM。
|
| 相关类别 |
|
| 靶点 |
Ki: 0.6 nM (CB2 receptor)[1]
|
| 体外研究 |
SR144528是一种有效的选择性CB2受体拮抗剂,Ki为0.6 nM。 SR144528单独能够以浓度依赖性方式(EC50 = 26±6 nM,两个实验)刺激CHO-CB2细胞中毛喉素敏感的腺苷酸环化酶活性,最大效应为1μM(4倍刺激),而在这种浓度对CHO-CB1细胞没有显着影响(15％抑制)[1]。补充有SR144528的原始264.7巨噬细胞显示出降低的胱天蛋白酶-3活性。 SR144528以浓度依赖性方式抑制微粒体酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶(ACAT)活性,IC50值为3.6±1.1μM。在10μM时,SR144528抑制ACAT活性~68％[2]。
|
| 体内研究 |
在小鼠口服(至多10mg/kg)或icv(10μg/动物)施用SR144528后,未观察到[3H] -CP 55,940与其脑中特定位点的结合的影响。 SR144528对脾大麻素受体的占据是时间依赖性的,并且在口服3mg/kg后至少18小时显着[1]。当单独给予时,SR144528不会对胃肠(GI)运动产生任何显着影响。 SR144528不会阻断但会增强延迟胃排空[3]。
|
| 激酶实验 |
测量MAP激酶活性。简而言之，在施用配体之前，将生长至80％汇合的细胞维持在含有0.5％胎牛血清的培养基中24小时。预先用PBS洗涤的CHO-CB1或-CB2细胞在不存在（基础活性）或在SR144528（10-9至3×10-6M）存在下于37℃温育20分钟。然后将细胞在4℃下用0.5mL缓冲液A [50mM Tris-HCl，pH 7.5,150mM NaCl，1mM乙二醇 - 双 - （β-氨基乙基醚）N，N，N'，N-四乙酸洗涤。酸，1mM Na 3 PO 4]并在补充有1％triton X-100,10μg/ mL抑肽酶，10μg/ mL，亮抑酶肽，1mM二硫苏糖醇和1mM苯甲基磺酰氟的缓冲液A中裂解15分钟。然后通过在4℃下以14,000×g离心15分钟澄清溶解的细胞提取物。取出等分试样（15μL）并储存在-80℃直至使用。通过使用p42 / p44MAP激酶酶系统，用γ-[33P] ATP在30℃下进行磷酸化测定30分钟（线性测定条件）。掺入的放射性通过液体闪烁计数确定[1]。
|
| 细胞实验 |
cAMP累积在CHO-CB1或-CB2细胞中进行。用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞，并在不存在或存在SR144528（3×10-9至10-5M）的情况下，在37℃下在1mL PBS中温育15分钟。加入毛喉素（3μM终浓度）并将细胞在37℃再孵育20分钟。通过快速抽吸测定培养基并加入1.5mL冰冷的50mM Tris-HCl，pH8,4mM乙二胺四乙酸终止反应。将培养皿置于冰上5分钟，然后将提取物转移到玻璃管中。将提取物煮沸并以3500g离心10分钟以消除细胞碎片。将来自上清液的等分试样干燥，并通过使用闪烁体邻近测定系统通过放射免疫测定法测定cAMP浓度。在没有毛喉素的情况下测定基础活性[1]。
|
| 动物实验 |
在该研究中使用雄性Wistar大鼠（240至300g）。在动物到达实验室一周后，进行三组不同的实验。在第三组实验中，在大鼠中施用SR144528（1mg / kg ip）。还在载体处理的大鼠中分析了SR144528的作用。 SR144528的体积调节至最大4至5 mL / kg [3]。
|
| 参考文献 |
[1]. Rinaldi-Carmona M, et al. SR 144528, the first potent and selective antagonist of the CB2 cannabinoid receptor. J Pharmacol Exp Ther. 1998 Feb;284(2):644-50. [2]. Thewke D, et al. AM-251 and SR144528 are acyl CoA:cholesterol acyltransferase inhibitors. Biochem Biophys Res Commun. 2009 Apr 3;381(2):181-6. [3]. Abalo R, et al. The cannabinoid antagonist SR144528 enhances the acute effect of WIN 55,212-2 on gastrointestinal motility in the rat. Neurogastroenterol Motil. 2010 Jun;22(6):694-e206.
|
