Ripasudil自由基地

更新时间:2024-01-02 19:47:36

Ripasudil自由基地结构式
Ripasudil自由基地结构式
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常用名 Ripasudil自由基地 英文名 K-115 (free base)
CAS号 223645-67-8 分子量 323.386
密度 1.3±0.1 g/cm3 沸点 497.2±55.0 °C at 760 mmHg
分子式 C15H18FN3O2S 熔点 N/A
MSDS N/A 闪点 254.5±31.5 °C

 Ripasudil自由基地用途


Ripasudil free base (K-115 free base) 是 ROCK 特异性抑制剂,能够抑制 ROCK2 和 ROCK1 的活性,IC50 值分别为 19 和 51 nM。

 Ripasudil自由基地名称

中文名 Ripasudil自由基地
英文名 4-fluoro-5-[[(2S)-2-methyl-1,4-diazepan-1-yl]sulfonyl]isoquinoline
英文别名 更多

 Ripasudil自由基地生物活性

描述 Ripasudil free base (K-115 free base) 是 ROCK 特异性抑制剂,能够抑制 ROCK2 和 ROCK1 的活性,IC50 值分别为 19 和 51 nM。
相关类别
靶点

ROCK2:19 nM (IC50)

ROCK1:51 nM (IC50)

CaMKIIa:370 nM (IC50)

PKACa:2.1 μM (IC50)

PKC:27 μM (IC50)

体外研究 Ripasudil(K-115)是ROCK的有效抑制剂,ROCK2和ROCK1的IC50分别为19和51 nM。 Ripasudil对CaMKIIα,PKACα和PKC的抑制活性也较低,IC50分别为370 nM,2.1μM和27μM[1]。 Ripasudil(K-115;1,10μM)诱导细胞骨架变化,包括回缩和细胞变圆以及培养的小梁网(TM)细胞的肌动蛋白束减少。 Ripasudil(5μM)显着降低经内皮电阻(TEER),并增加Schlemm管内皮细胞(SCE)单层细胞的FITC-葡聚糖渗透性[2]。
体内研究 Ripasudil(K-115)以浓度依赖性方式降低眼内压(IOP),在猴眼中浓度为0.1%至0.4%,在兔眼中浓度为0.0625%至0.5%[1]。 Ripasudil(K-115; 1 mg/kg,每日口服)显示神经压迫(NC)后视网膜神经节细胞(RGC)的神经保护作用。 Ripasudil还抑制小鼠轴突损伤诱导的氧化应激。 Ripasudil抑制NC损伤后RGC中ROS的时间依赖性产生[3]。
激酶实验 将ROCK 1(0.75 ng / mL)和ROCK 2(0.5 ng / mL)与各种浓度的Ripasudil,Y-27632或HA-1077在25°C下在50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)中孵育90分钟)含有100mM KCl,10mM MgCl 2,0.1mM EGTA,30mM长S6激酶底物肽和1mM ATP,总体积为40mL。 PKACa,PKC和CaMKIIa也与各种浓度的Ripasudil,Y-27632或HA-1077一起温育。将PKACa(0.0625 ng / mL)在含有20 mM MgCl 2,1 mg / mL BSA,5 mM Kemptide肽底物和1 mM ATP的40 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)中于25°C孵育30分钟总体积为40 mL。将PKC(0.025 ng / mL)在含有20 mM MgCl 2,0.4 mM CaCl 2,0.1 mg / mL BSA,0.25 mM EGTA,25 ng / mL的20 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)中于25°C孵育80分钟磷脂酰丝氨酸,2.5ng / mL二酰基甘油,0.0075%Triton-X-100,25mM DTT,10mM Neurogranin(28-43)肽底物和1mM ATP,总体积为40mL。将CaMKIIa(0.025 ng / mL)在含有10 mM MgCl2,2 mM CaCl2,0.04 mg / mL BSA,16 mg / mL纯化钙调蛋白的50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)中于25°C孵育90分钟睾丸,500mM DTT,50mM Autocamitide 2和1mM ATP,总体积为40mL。孵育后,加入40mL KinaseGlo发光激酶测定溶液,并使其在25℃保持10分钟,并使用发光计测量相对光单位(RLU)。不含试验化合物的RLU设定为100%(对照值),不含酶和化合物的RLU设定为0%(正常值)。然后通过添加每种浓度的测试化合物从RLU计算反应速率(对照的%),并且使用SAS [1]通过逻辑回归分析确定50%抑制浓度(IC 50)。
细胞实验 将小梁网细胞(TM)细胞以每孔1×10 4个细胞的密度接种在6孔板上,在含有10%FBS的DMEM中。在过夜培养后,当细胞达到半流量时,将1或10μMRipasudil,10μMY-27632或10μM法舒地尔加入培养孔中。 PBS用作对照载体。 60分钟后,除去药物溶液并用含有10%FBS的DMEM代替。通过相差显微镜观察细胞,并在药物施用后60分钟和药物去除后2小时拍照。对于免疫组织化学,将TM细胞以每孔1×10 4个细胞的密度接种在明胶包被的8孔室载玻片上,在含有10%FBS的DMEM中。在过夜培养后,当细胞达到半流量时,将细胞在1或10μM的Ripasudil,10μM的Y-27632或10μM的法舒地尔孵育60分钟。 PBS用作对照载体。取出药物溶液并在2小时后用含有10%FBS的DMEM替换。将细胞用PBS中的4%多聚甲醛固定15分钟,然后用细胞骨架缓冲液(10mM MES,150mM NaCl,5mM EGTA,5mM MgCl 2,5mM葡萄糖,pH 6.1)和血清缓冲液(PBS中10%FBS)洗涤。 )。细胞用PBS中的0.5%Triton X-100在室温下透化12分钟,并在4℃下用血清缓冲液封闭至少2小时。丝状肌动蛋白(F-肌动蛋白)在室温下用0.05mg / mL鬼笔环肽-TRITC标记1小时。用PBS洗涤后,用含有DAPI的商业封固剂固定细胞,并用荧光显微镜观察。拍摄F-肌动蛋白和DAPI图像的曝光分别为0.1和0.05秒[2]。
动物实验 兔子[1]在兔子实验中,将50mL浓度为0.0625%,0.125%,0.25或0.5%的载体或瑞帕司他滴入一只眼睛中。在滴注前和滴注后0.5,1,2,3,4和5小时测量双眼的眼压(IOP)。对侧眼未治疗。给动物施用使用拉丁方法指定的所有浓度的Ripasudil,间隔至少2天。猴子[1]在猴子实验中,将20mL浓度为0.1%,0.2%或0.4%的Ripasudil和浓度为0.005%的拉坦前列素滴注到一只眼睛中。在滴注前和滴注后1,2,4,6和8小时测量双眼的IOP。对侧眼未治疗。使用拉丁方法将动物安排接受所有制剂,间隔至少1周。将IOP与给药前和滴注瑞帕司他后的每个时间点的滴注侧的结果进行比较,并在每个时间点与双眼进行比较。
参考文献

[1]. Isobe T, et al. Effects of K-115, a rho-kinase inhibitor, on aqueous humor dynamics in rabbits. Curr Eye Res. 2014 Aug;39(8):813-22.

[2]. Kaneko Y, et al. Effects of K-115 (Ripasudil), a novel ROCK inhibitor, on trabecular meshwork and Schlemm's canal endothelial cells. Sci Rep. 2016 Jan 19;6:19640.

[3]. Yamamoto K, et al. The novel Rho kinase (ROCK) inhibitor K-115: a new candidate drug for neuroprotective treatment in glaucoma. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2014 Oct 2;55(11):7126-36.

 Ripasudil自由基地物理化学性质

密度 1.3±0.1 g/cm3
沸点 497.2±55.0 °C at 760 mmHg
分子式 C15H18FN3O2S
分子量 323.386
闪点 254.5±31.5 °C
精确质量 323.110382
PSA 70.68000
LogP 1.72
蒸汽压 0.0±1.3 mmHg at 25°C
折射率 1.589
储存条件 2-8℃

 Ripasudil自由基地英文别名

Isoquinoline,4-fluoro-5-(((2S)-hexahydro-2-methyl-1H-1,4-diazepin-1-yl)sulfonyl)
4-Fluoro-5-{[(2S)-2-methyl-1,4-diazepan-1-yl]sulfonyl}isoquinoline
Ripasudil [INN]
Isoquinoline, 4-fluoro-5-[[(2S)-hexahydro-2-methyl-1H-1,4-diazepin-1-yl]sulfonyl]-
1H-1,4-Diazepine,1-((4-fluoro-5-isoquinolinyl)sulfonyl)hexahydro-2-methyl-,(2S)
Ripasudil
K-115 (free base)