| 描述 |
AS1517499 是有效的 STAT6 抑制剂,IC50 为 21 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
STAT6:21 nM (IC50)
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| 体外研究 |
AS1517499显示有效的STAT6抑制,IC50值为21 nM,并且还抑制IL-4诱导的小鼠脾T细胞Th2分化,IC50值为2.3 nM且不影响IL诱导的T辅助细胞1(Th1)分化。 -12。 AS1517499选择性抑制Th2分化而不影响Th1分化[1]。在培养的人BSM细胞中,IL-13(100ng/mL)引起STAT6的磷酸化和RhoA的上调,RhoA是负责平滑肌收缩的Ca2 +致敏的单体GTP酶：通过与AS1517499共孵育来抑制这两种事件。 (100 nM)[2]。
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| 体内研究 |
在用卵清蛋白抗原主动致敏和反复攻击的BALB/c小鼠中,在最后一次抗原攻击后观察到支气管肺泡灌洗液中IL-13水平升高和支气管组织中STAT6磷酸化。这些小鼠具有增强的BSM对乙酰胆碱的收缩性以及支气管组织中RhoA的上调。在每次卵白蛋白暴露前1小时腹膜内注射AS1517499(10 mg/kg)可以抑制抗原诱导的RhoA上调和BSM高反应性,几乎完全[2]。
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| 细胞实验 |
正常人BSM细胞（hBSMCs）维持在补充有5％胎牛血清，0.5ng / mL人表皮生长因子（hEGF），5μg/ mL胰岛素，2ng / mL人成纤维细胞生长因子 - 碱性（hFGF）的SmBM培养基中。 -b），50μg/ mL庆大霉素和50ng / mL两性霉素B.将细胞保持在37℃的潮湿气氛（5％CO 2）中，每48至72小时喂食，并在细胞达到90至95时传代。 ％汇合。然后将hBSMC（第7-9代）接种于6孔板和8孔室载玻片中，密度为3,500个细胞/ cm2，当观察到80-85％汇合时，细胞在没有血清的情况下培养24小时，然后加入重组蛋白是人IL-13。在加入IL-13（100ng / mL）之前30分钟处理AS1517499（100nM）或其载体（0.3％DMSO）。在一些实验中，在添加IL-13后3小时或12小时处理AS1517499（共孵育）。在另一系列实验中，还在施用IL-13之前15分钟施用选择性Rho激酶抑制剂Y-27632（1μM）或其载体（0.3％DMSO）。在IL-13处理后的指定时间，用PBS洗涤细胞，立即收集，并用1×SDS样品缓冲液（250μL/孔）破碎，并用于Western印迹分析[2]。
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| 动物实验 |
小鼠[2]使用雄性BALB / c小鼠。制备具有体内AHR的过敏性支气管哮喘的鼠模型。简言之，在第0天和第5天，通过腹膜内注射8μg卵清蛋白（OVA）和2mg Imject Alum对BALB / c小鼠（8周龄）进行活化致敏。用雾化OVA-盐水溶液攻击致敏小鼠（在第12,16和20天，将对照组的小鼠接受相同的免疫程序但吸入盐水气溶胶代替OVA攻击，持续30分钟。用超声雾化器产生气溶胶，并将其引入Plexiglas室盒（130×200mm，100mm高），其中放置小鼠。在每次抗原吸入（第12,16和20天）之前1小时，动物也接受腹膜内注射AS1517499（1或10mg / kg /天;在盐水中溶解于20％DMSO中）或其载体。在最后一次OVA攻击后24小时，通过在尿烷（1.6g / kg，腹膜内）麻醉下从腹主动脉放血来杀死小鼠。
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| 参考文献 |
[1]. Nagashima S, et al. Synthesis and evaluation of 2-{[2-(4-hydroxyphenyl)-ethyl]amino}pyrimidine-5-carboxamide derivatives as novel STAT6 inhibitors. Bioorg Med Chem. 2007 Jan 15;15(2):1044-55. [2]. Am J Respir Cell Mol Biol. 2009 Nov;41(5):516-24.
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