布格替尼的生物活性

布格替尼是一种癌症药物，可以干扰体内癌细胞的生长和扩散。布格替尼用于治疗已扩散至身体其他部位的非小细胞肺癌。它是一种有效的，选择性的 ALK 抑制剂，IC50 值为 0.6 nM。

一、布格替尼的生物活性
1）体外生物活性：
布格替尼有效抑制ALK的体外激酶活性（IC50,0.6 nM）和所有测试的所有五种突变体变体，包括G1202R（IC50,0.6-6.6 nM）。 布格替尼表现出高度的选择性，仅抑制11种额外的天然或突变激酶，IC50 <10 nM。这些包括ROS1，FLT3和FLT3（D835Y）和EGFR（L858R; IC50,1.5-2.1nM）的突变体变体。 布格替尼对EGFR具有更适度的活性，具有T790M抗性突变（L858R / T790M），天然EGFR，IGF1R和INSR（IC50,29-160nM），并且不抑制MET（IC50> 1000nM）。在细胞试验中，布格替尼分别抑制ALK和ROS1，IC50分别为14和18 nM。 布格替尼以低约11倍的效力（IC50,148-158nM）抑制FLT3和IGF-1R，并抑制FLT3和EGFR的突变体变异，效力低15-35倍（IC50,211-489nM）。 布格替尼在三种ALK阴性ALCL和NSCLC细胞系中抑制细胞生长，GI50值范围为503至2,387 nM [1]。 布格替尼抑制ALK活性并消除ALK成瘾神经母细胞瘤细胞系的增殖，IC50为75.27±8.89 nM。 布格替尼分别以10和4 nM水平抑制ALK-I1171N和ALK-G1269A突变受体[3]。除ALK，IGF1R和InsR外，布格替尼还有效抑制FLT3和ROS1，IC50值分别为2.1和1.9 nM。 它没有显示出对c-Met或Ron高达1μM的显着活性。 布格替尼克服了EGFR三重突变体的耐药性，其活性依赖于ATP竞争性方式，对野生型EGFR的影响较小。

2）体内生物活性：
布格替尼（10,25或50mg / kg每天一次，口服）导致ALK + Karpas-299（ALCL）和H2228（NSCLC）异种移植小鼠模型中肿瘤生长的剂量依赖性抑制。 与克唑替尼相比，布格替尼显着增强携带ALK +脑肿瘤的小鼠的存活[1]。 布格替尼（10,25,50 mg / kg，口服）导致剂量依赖性抗肿瘤活性，在NSCLC小鼠模型中有肿瘤消退[2]。口服给药（10mg / kg）后布格替尼的小鼠PK参数：Cmax = 448ng / mL，t1 / 2 = 5.8h。 并且在CD大鼠中，在以3mg / kg i.v给药后，CL = 0.46L /（h·kg），t1 / 2 = 4.8h，Vss = 7.8L / kg; 剂量为10mg / kg p.o，Cmax = 305ng / mL，tmax = 4h，t1 / 2 = 3.4h，F％= 52。 布格替尼具有剂量依赖性抗肿瘤活性。 布格替尼在PC9三重突变体异种移植模型中显示生长抑制活性，并与抗EGFR抗体结合，以增强体外和体内功效，如第一代EGFR-TKI抗性患者所示。

二、生物活性实验方法
1）动物实验
小鼠：（1）8至10周龄雌性SCID /米色小鼠静脉注射每只小鼠5×106个H3122细胞，当平均肿瘤大小达到300mm3时，随机选择治疗组（n = 10） （零日）。 治疗以10mL / kg剂量体积口服给药连续21天。 每周测量皮下肿瘤两次或三次。 使用公式（L×W2）/ 2计算肿瘤体积（以mm 3计）。 当肿瘤达到宿主体重的10％时，通过CO 2窒息使动物安乐死。 （2）8至10周龄雌性SCID /米色小鼠皮下注射每只小鼠2.5×106个Karpas-299细胞，当平均肿瘤大小达到约180mm3时，随机选择治疗组（n = 10）（ 第零天）。 以10mL / kg剂量体积连续14天口服给药。 如针对H3122模型所述测量和计算肿瘤体积。
2）细胞实验
以每孔15,000个细胞接种细胞，并连续稀释所示抑制剂。 72小时后，通过刃天青评估细胞活力。 通过将数据拟合至log（抑制剂浓度）对标准化响应（可变斜率）方程，用GraphPad Prism 6.0计算IC 50值。 每个实验一式两份进行并重复至少三次。
3）激酶实验
进行了289种激酶的体外HotSpotSM激酶谱分析。 该测定在10μM[33P] -ATP存在下进行，使用浓度范围为0.05nM至1μM的布依他尼。