他拉唑帕利-作用-生物活性-靶点活性
发布时间：2019-01-04 19:18:18 编辑作者：活性小子
图片：他拉唑帕利结构式
他拉唑帕利，英文名Talazoparib，别名BMN-673或者LT-673，它（IC50 = 0.58 nM）是一种新型PARP抑制剂，可有效抑制PARP-2，对PTEN突变非常敏感。他拉唑帕利不抑制PARG。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。
首先我们介绍他拉唑帕利的生物活性：
1）体外活性
他拉唑帕利表现出优异的效力，抑制PARP1和PARP2酶活性，分别为Ki = 1.2和0.87 nM [1]。他拉唑帕利具有选择性抗肿瘤细胞毒性，并以比前一代PARP1 / 2抑制剂（如Olaparib，Rucaparib和Veliparib）低得多的浓度引发DNA修复生物标志物[2]。
2）体内活性
他拉唑帕利（1mg / kg，口服）可口服，在口服给予单剂或与化学治疗剂组合后，在BRCA1突变体MX-1乳腺癌异种移植模型中显示出有利的药代动力学（PK）特性和显着的抗肿瘤功效。作为替莫唑胺和顺铂[1]。他拉唑帕利易于口服生物利用，当在羧甲基纤维素中给药时，大鼠的绝对口服生物利用度超过40％。他拉唑帕利的口服给药引起显着的抗肿瘤活性，由于BRCA突变或PTEN缺乏导致DNA修复缺陷的异种移植肿瘤对小鼠耐受良好的口服他拉唑帕利治疗非常敏感[2]。kg）使缺血动物中TNF-αmRNA的水平降低70％，并且处理小鼠中的这些值与假动物或幼稚动物的这些值没有差异。与载体治疗的缺血小鼠相比，用他拉唑帕利治疗缺血小鼠的E-选择素mRNA水平降低了81％，ICAM-1 mRNA水平降低了54％[2]。
我们已经了解了他拉唑帕利的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）细胞实验
在单药试验中，Capan-1细胞（BRCA2缺陷型），MX-1（BRCA1缺陷型）细胞或其他培养细胞以密度接种，允许在96孔板中线性生长10-12天（通常 500-3000个细胞/孔）。将细胞在其推荐的含有不同浓度的PARP抑制剂（Veliparib，Rucaparib，Niraparib，Olaparib和他拉唑帕利）的生长培养基中处理10-12天（每5天用新鲜化合物更换培养基）。使用GraphPad Prism5 [1]计算IC 50值。
2）动物实验
小鼠[1]-制备MX-1肿瘤异种移植物。当肿瘤达到约150mm 3的平均体积时，以单剂量给予奥拉帕尼（100mg / kg），他唑巴肽（1mg / kg）或媒介物。在药物给药后2小时，8小时和24小时收获肿瘤并在液氮中快速冷冻。然后将肿瘤组织在PBS中在冰上匀浆并用裂解缓冲液（25mM Tris，pH 8.0,150mM NaCl，5mM EDTA，2mM EGTA，25mM NaF，2mM Na 3 VO 4,1mM Pefabloc，1％Triton X）提取。-100，含有1％SDS的蛋白酶抑制剂混合物。使用PARP体内PD测定II试剂盒通过ELISA测定肿瘤裂解物中PAR的水平。
3）激酶实验
使用PARP1测定试剂盒评估测试化合物抑制PARP1酶活性的能力。使用GraphPad Prism5软件计算IC 50值。对于PARP抑制剂Ki测定，酶测定在96孔FlashPlate中进行，其中含有0.5U PARP1酶，0.25x活化DNA，0.2μCi[3H] NAD和5μM冷NAD，终浓度为50μL，含有反应缓冲液10％甘油（v / v），25mM HEPES，12.5mM MgCl 2,50mM KCl，1mM二硫苏糖醇（DTT）和0.01％NP-40（v / v），pH 7.6。
通过在有或没有抑制剂的情况下将NAD添加到PARP反应混合物中并在室温下孵育1分钟来引发反应。然后向每个孔中加入50微升冰冷的20％三氯乙酸（TCA）以淬灭反应。将板密封并在室温下再摇动120分钟，然后离心。绑定到FlashPlate的放射性信号使用TopCount确定。使用来自各种底物浓度（1-100μMNAD）的Michaelis-Menten方程测定PARP1 Km。根据下式，由酶抑制曲线计算化合物Ki：Ki = IC50 / [1+（底物）/ Km]。用相同的测定方案测定PARP2酶和化合物Ki的Km，不同的是在室温下将30ng的PARP2,0.25x活化的DNA，0.2μCi[3H] NAD和20μM的冷NAD用于反应30分钟[ 1]。
今天介绍了他拉唑帕利的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，他拉唑帕利Talazoparib是高效的 PARP1/2 抑制剂，Ki 值分别为 1.2 nM 和 0.87 nM。它的靶点活性是PARP,0.58nM。
您可能想了解他拉唑帕利的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/1207456-01-6_1042899.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Wang B, et al. Discovery and Characterization of (8S,9R)-5-Fluoro-8-(4-fluorophenyl)-9-(1-methyl-1H-1,2,4-triazol-5-yl)-2,7,8,9-tetrahydro-3H-pyrido[4,3,2-de]phthalazin-3-one (BMN 673, Talazoparib), a Novel, Highly Potent, and Orally Efficacious Poly(ADP-
[2]. Shen Y, et al. BMN 673, a novel and highly potent PARP1/2 inhibitor for the treatment of human cancers with DNA repair deficiency.Clin Cancer Res. 2013 Sep 15;19(18):5003-15.
首先我们介绍他拉唑帕利的生物活性：
1）体外活性
他拉唑帕利表现出优异的效力，抑制PARP1和PARP2酶活性，分别为Ki = 1.2和0.87 nM [1]。他拉唑帕利具有选择性抗肿瘤细胞毒性，并以比前一代PARP1 / 2抑制剂（如Olaparib，Rucaparib和Veliparib）低得多的浓度引发DNA修复生物标志物[2]。
2）体内活性
他拉唑帕利（1mg / kg，口服）可口服，在口服给予单剂或与化学治疗剂组合后，在BRCA1突变体MX-1乳腺癌异种移植模型中显示出有利的药代动力学（PK）特性和显着的抗肿瘤功效。作为替莫唑胺和顺铂[1]。他拉唑帕利易于口服生物利用，当在羧甲基纤维素中给药时，大鼠的绝对口服生物利用度超过40％。他拉唑帕利的口服给药引起显着的抗肿瘤活性，由于BRCA突变或PTEN缺乏导致DNA修复缺陷的异种移植肿瘤对小鼠耐受良好的口服他拉唑帕利治疗非常敏感[2]。kg）使缺血动物中TNF-αmRNA的水平降低70％，并且处理小鼠中的这些值与假动物或幼稚动物的这些值没有差异。与载体治疗的缺血小鼠相比，用他拉唑帕利治疗缺血小鼠的E-选择素mRNA水平降低了81％，ICAM-1 mRNA水平降低了54％[2]。
我们已经了解了他拉唑帕利的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：
1）细胞实验
在单药试验中，Capan-1细胞（BRCA2缺陷型），MX-1（BRCA1缺陷型）细胞或其他培养细胞以密度接种，允许在96孔板中线性生长10-12天（通常 500-3000个细胞/孔）。将细胞在其推荐的含有不同浓度的PARP抑制剂（Veliparib，Rucaparib，Niraparib，Olaparib和他拉唑帕利）的生长培养基中处理10-12天（每5天用新鲜化合物更换培养基）。使用GraphPad Prism5 [1]计算IC 50值。
2）动物实验
小鼠[1]-制备MX-1肿瘤异种移植物。当肿瘤达到约150mm 3的平均体积时，以单剂量给予奥拉帕尼（100mg / kg），他唑巴肽（1mg / kg）或媒介物。在药物给药后2小时，8小时和24小时收获肿瘤并在液氮中快速冷冻。然后将肿瘤组织在PBS中在冰上匀浆并用裂解缓冲液（25mM Tris，pH 8.0,150mM NaCl，5mM EDTA，2mM EGTA，25mM NaF，2mM Na 3 VO 4,1mM Pefabloc，1％Triton X）提取。-100，含有1％SDS的蛋白酶抑制剂混合物。使用PARP体内PD测定II试剂盒通过ELISA测定肿瘤裂解物中PAR的水平。
3）激酶实验
使用PARP1测定试剂盒评估测试化合物抑制PARP1酶活性的能力。使用GraphPad Prism5软件计算IC 50值。对于PARP抑制剂Ki测定，酶测定在96孔FlashPlate中进行，其中含有0.5U PARP1酶，0.25x活化DNA，0.2μCi[3H] NAD和5μM冷NAD，终浓度为50μL，含有反应缓冲液10％甘油（v / v），25mM HEPES，12.5mM MgCl 2,50mM KCl，1mM二硫苏糖醇（DTT）和0.01％NP-40（v / v），pH 7.6。
通过在有或没有抑制剂的情况下将NAD添加到PARP反应混合物中并在室温下孵育1分钟来引发反应。然后向每个孔中加入50微升冰冷的20％三氯乙酸（TCA）以淬灭反应。将板密封并在室温下再摇动120分钟，然后离心。绑定到FlashPlate的放射性信号使用TopCount确定。使用来自各种底物浓度（1-100μMNAD）的Michaelis-Menten方程测定PARP1 Km。根据下式，由酶抑制曲线计算化合物Ki：Ki = IC50 / [1+（底物）/ Km]。用相同的测定方案测定PARP2酶和化合物Ki的Km，不同的是在室温下将30ng的PARP2,0.25x活化的DNA，0.2μCi[3H] NAD和20μM的冷NAD用于反应30分钟[ 1]。
今天介绍了他拉唑帕利的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，他拉唑帕利Talazoparib是高效的 PARP1/2 抑制剂，Ki 值分别为 1.2 nM 和 0.87 nM。它的靶点活性是PARP,0.58nM。
您可能想了解他拉唑帕利的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/1207456-01-6_1042899.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。
参考文献：
[1]. Wang B, et al. Discovery and Characterization of (8S,9R)-5-Fluoro-8-(4-fluorophenyl)-9-(1-methyl-1H-1,2,4-triazol-5-yl)-2,7,8,9-tetrahydro-3H-pyrido[4,3,2-de]phthalazin-3-one (BMN 673, Talazoparib), a Novel, Highly Potent, and Orally Efficacious Poly(ADP-
[2]. Shen Y, et al. BMN 673, a novel and highly potent PARP1/2 inhibitor for the treatment of human cancers with DNA repair deficiency.Clin Cancer Res. 2013 Sep 15;19(18):5003-15.
相关化合物：他拉唑帕利