恩曲替尼的作用和生物活性

恩曲替尼是TrkA（IC50：1.7nM），TrkB（IC50：0.1nM）和TrkC（IC50：0.1nM）的抑制剂，以及间变性淋巴瘤激酶（ALK;IC50：1.6nM）和C-ros癌基因1（ROS1;IC50：0.2nM）。恩曲替尼阻断ALK依赖性细胞系的增殖，包括具有C1156Y或L1196M抗性突变的细胞系，并抑制ALK依赖性信号传导。已经显示它抑制携带EML4-ALK重排的非小细胞肺Y细胞系的生长。在携带各种ROS1，Trk或ALK驱动的异种移植物的小鼠中，恩曲替尼已显示诱导肿瘤消退。

一、恩曲替尼的生物活性详解：
1）体外活性
恩曲替尼在抑制有限数量细胞系的增殖方面具有极好的活性：TRKA驱动的结肠直肠癌细胞系KM12（IC50为17nM），ALK依赖性ALCL细胞系SU-DHL-1，Karpas-299，SUP-M2和SR-786（分别为20,31,41和81nM的IC50），ALK依赖性NSCLC细胞系NCI-H2228（IC50为68nM）和FLT3依赖性AML细胞系MV-4-11（IC50为81nM）。恩曲替尼有效抑制ALK依赖性信号传导和特异性阻断ALK依赖性细胞系的增殖。恩曲替尼还显着抑制携带EML4-ALK重排的NCI-H2228细胞系的细胞生长。

恩曲替尼有效阻断Ba/F3-TEL-TRKB（IC50为2.9nM），Ba/F3-TEL-TRKC（IC50为3.3nM）和Ba/F3-TEL-ROS1（IC50为5.3nM）细胞的增殖，与亲本Ba/F3细胞或由非靶向激酶如ABL和RET转化的细胞相比具有高度选择性，IC50在2~3μM范围内被抑制[1]。恩曲替尼在体外显着抑制表达TrkB的NB细胞的生长，并且当组合使用时它显着增强Irino-TMZ的生长抑制[2]。

2）体内活性
向携带肿瘤的小鼠口服施用恩替尼尼诱导相关人类异种移植肿瘤的消退，包括TRKA依赖性结直肠癌KM12，ROS1驱动的肿瘤和几种不同组织起源的ALK依赖模型，包括脑局部肺的模型癌转移[1]。与对照动物相比，单药治疗导致用恩替尼尼治疗的动物显着抑制肿瘤生长[2]。

在携带Karpas-299和SR-786异种移植物的小鼠中，恩曲替尼（p.o。）诱导完全肿瘤消退。在NPM-ALK转基因小鼠中，恩曲替尼诱导在胸腺和淋巴结中观察到的肿瘤块完全消退。[2]在NB异种移植模型中，恩曲替尼联合治疗增强了常规化疗的疗效。[3]

二、恩曲替尼的活性实验方法：
1）动物实验
小鼠：恩曲替尼在含有1％吐温80的0.5％甲基纤维素中重建，最终给药体积为10mL/kg（例如，对于20gm小鼠为0.2mL）。当肿瘤接种平均肿瘤大小为0.2cm3时，用恩曲替尼，Irino和TMZ治疗开始于肿瘤接种后约15-17天。当肿瘤体积达到3cm3时，处死小鼠。收获肿瘤并在干冰上快速冷冻以分析蛋白质表达[2]。

2）细胞实验
将LF，NLF-TrkB，SY5Y或SY5Y-TrkB细胞接种于96孔板中，并将它们暴露于不同浓度的药物（1,5,1,10,20,30,50和100nM的entrectinib，1.5μMIrino和分别为50μMTMZ）1小时，然后加入100ng/mLBDNF。在加入药物后24,48和72小时收获平板。处理平板并使用标准SRB测定方案分析细胞活力[2]。

综上所述：恩曲替尼是有效，有口服活性的Trk,ROS1,和ALK抑制剂；抑制TrkA,TrkB,TrkC,ROS1和ALK的IC50值分别为1,3,5,12和7nM。它的靶点活性为ALK,1nM；ROS1,1nM；TrkA,1nM；TrkB,1nM；TrkC,1nM。

参考文献：
[1]. Ardini E, et al. Entrectinib, a Pan-TRK, ROS1, and ALK Inhibitor with Activity in Multiple Molecularly Defined Cancer Indications. Mol Cancer Ther. 2016 Apr;15(4):628-39.
[2]. Iyer R, et al. Entrectinib is a potent inhibitor of Trk-driven neuroblastomas in a xenograft mouse model. Cancer Lett. 2016 Mar 28;372(2):179-86.
[3]. Lyer R, et al. Cancer Res. 2015, 75, 5390.