1082744-20-4

• 常用中文名：PF-04447943
• 常用英文名：PF-04447943
• CAS号：1082744-20-4
• 分子式：C₂₀H₂₅N₇O₂
• 分子量：395.458
• 相关类别： 信号通路 代谢酶/蛋白酶 磷酸二酯酶(PDE)
• 发布时间：2016-11-14 18:05:50
• 更新时间：2024-01-02 19:15:05
• PF-04447943 是一种有效的人重组 PDE9A 抑制剂,IC50 为 12 nM,比作用于其他PDE家族成员选择性高 78 倍 (IC50>1000 nM)。

名称

• 中文名: PF-04447943
• 英文名: 6-[(3S,4S)-4-methyl-1-(pyrimidin-2-ylmethyl)pyrrolidin-3-yl]-1-(oxan-4-yl)-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-one
• 英文别名: CS-0942; UNII-7N969W8Y4O; 4H-Pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-one, 1,5-dihydro-6-[(3S,4S)-4-methyl-1-(2-pyrimidinylmethyl)-3-pyrrolidinyl]-1-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)-; 6-((3S,4S)-4-Methyl-1-(pyrimidin-2-ylmethyl)pyrrolidin-3-yl)-1-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)-1,5-dihydro-4H-pyrazolo(3,4-d)pyrimidin-4-one; 6-[(3S,4S)-4-Methyl-1-(2-pyrimidinylmethyl)-3-pyrrolidinyl]-1-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)-1,5-dihydro-4H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-one; PF-04447943

物化性质

• 密度: 1.5±0.1 g/cm3
• 分子式: C₂₀H₂₅N₇O₂
• 分子量: 395.458
• 精确质量: 395.206970
• PSA: 102.08000
• LogP: -0.44
• 外观性状: 浅黄色至黄色粉末
• 折射率: 1.763
• 储存条件: -20℃

生物活性

• 描述: PF-04447943 是一种有效的人重组 PDE9A 抑制剂,IC50 为 12 nM,比作用于其他PDE家族成员选择性高 78 倍 (IC50>1000 nM)。
• 相关类别:
  信号通路 >> 代谢酶/蛋白酶 >> 磷酸二酯酶(PDE)
  研究领域 >> 神经疾病
• 靶点:

  IC50: 12 nM (PDE9A)[1]

• 体外研究: 在无细胞试验中使用重组人,恒河猴和大鼠PDE9A2,PF-04447943显示具有2.8±0.26,4.5±0.13和18.1±1.9nM的Ki(分别为n = 4,11和9)。发现PF-04447943对其他PDE酶具有高选择性(PDE1,Ki = 8600±2121 nM,n = 5; PDE2A3,Ki> 99,000 nM; PDE3A,Ki> 50,000 nM; PDE4A,Ki> 29,000 nM; PDE5A, Ki = 14,980±5025nM,n = 5; PDE6C,Ki = 5324±2612nM,n = 4; PDE7A2,Ki> 75,000nM; PDE8A,Ki> 50,000nM; PDE10,Ki> 51,250±20,056nM,n = 4 ; PDE11,Ki> 80,000nM)并且在~60种其他受体/酶中没有其他显着活性。在表达恒河猴PDE9A2的HEK全细胞中,PF-04447943抑制ANP(0.3μM)刺激的cGMP,IC50为375±36.9 nM(n = 16)[2]。
• 体内研究: 基于iv和po给药,在大鼠中用PF-04447943进行的药代动力学研究表明Tmax为0.3h,T1/2为4.9h,Cl为21.7mL/min/kg,口服生物利用度为47％。在大鼠口服给药30分钟(1-30mg/kg)后,PF-04447943浓度在血液,脑和脑脊液(CSF)中剂量依赖性地增加。大脑：给药后30分钟的血浆暴露比率范围从1mg/kg剂量的0.13至30mg/kg剂量的0.33。脑脊液水平约为大脑水平的50％。在小鼠中,PF-04447943(3,10,30mg/kg口服)剂量依赖性地增加PF-04447943的血浆和脑浓度,而脑与血浆的比率范围为0.26至0.7,尽管这不完全是剂量依赖性的。在30mg/kg剂量下,CSF cGMP水平以剂量依赖性方式从基础水平3pmol/mL增加至13.3pmol/mL(3.5倍)。 CSF cGMP水平也以剂量依赖性方式从载体处理动物的基础水平3pmol/mL增加至30mg/kg剂量的13.3pmol/mL(3.5倍)。在所有测试剂量下,CSF cGMP水平均升高,最大效果比对照组高30倍,每剂增加3.5倍[2]。
• 激酶实验: 进行PDE酶测定。 PDE1A-C，PDE2A，PDE3A / B，PDE4A-D，PDE7A / B，PDE8A / B，PDE9A，PDE10A和PDE11由全长重组克隆产生。 PDE5从人血小板中分离，PDE6从牛视网膜中分离。通过使用闪烁亲近测定法（SPA）测量PDE活性。通过测定固定量的酶并在每种酶的底物浓度为1/3 Km值存在下改变抑制剂浓度来研究PDE抑制剂的作用，使得IC 50值接近Ki值。将PF-4447943溶于100％DMSO中并在15％DMSO水中稀释至所需浓度。将酶原料缓慢解冻并在含有50mM Tris-HCl（室温pH7.5）和1.3mM MgCl2的测定缓冲液中稀释。此外，PDE1测定缓冲液含有2.8mM CaCl2。 PDE1C测定还需要添加活化剂钙调蛋白，最终测定浓度为100单位/ mL。通过向含有测试药物和放射性配体的384孔板添加稀释的酶来启动孵育（PDE1，PDE2，PDE5，PDE6，PDE9，PDE10和PDE11的50nM [3H] cGMP和PDE3的20nM [3H] cAMP） ，PDE4，PDE7和PDE8）。将测定在室温下孵育30分钟（PDE5和PDE6为60分钟）。通过加入磷酸二酯酶SPA珠粒终止反应，最终测定浓度为0.2mg /孔。 PDE9需要在珠子之前额外添加高浓度（10μM）的有效PDE9抑制剂以完全停止反应。通过分别测量由[3H] cGMP或[3H] cAMP放射性配体产生的[3H] 5'-GMP或[3H] 5'-AMP的量来评估测试化合物的活性。 [3H] 5'-GMP或[3H] 5'-AMP与SPA珠子结合的水平通过在添加珠子后10小时在Microbeta Trilux计数器中对测定板进行半流计数来确定。在饱和浓度的有效PDE抑制剂存在下，通过放射性配体结合确定非特异性结合。通过浓度响应的非线性回归（曲线拟合）计算每种测试化合物的IC 50值（发生50％特异性结合抑制的浓度）[1]。
• 细胞实验: 将恒河猴PDE9A2构建体亚克隆到pcDNA3.3 TOPO载体中，稳定转染以组成型表达恒河猴PDE9A2和hNPR1的HEK 293细胞与PF-04447943（30μM至1.5nM）在测定培养基中以10,000个细胞的密度温育。 /嗯，在37°C下保持30分钟。通过与0.3μMANP（心房利钠肽）在37℃温育另外30分钟来刺激环状GMP形成。温育后，用抗体/裂解缓冲液和ED试剂在室温下裂解细胞1小时。随后在室温下与EA Reagent温育30分钟，然后在室温下与底物试剂一起温育1小时后，通过在Envision微孔板光度计上测量发光来确定cGMP浓度。使用30μMPF-04447943测定基于细胞的测定中的最大抑制（100％活性），并且通过DMSO对照确定0％活性。 PF-04447943以10个点滴定一式四份滴定。使用最大抑制值计算抑制百分比，并使用Prism软件从浓度响应曲线计算IC 50值[2]。
• 动物实验: 小鼠和大鼠[2]对于小鼠研究，给予雄性C57Bl / 6J小鼠PF-04447943（3,10,30mg / kg口服）。对于大鼠研究，给予PF-04447943 10mg / kg静脉注射大鼠（菌株，重量范围和供体，如下面的新物体识别研究中所述）。在给药后的不同时间，用异氟烷麻醉动物。通过心脏穿刺抽取血样并置于冰上的EDTA管中。分离血浆并在-70℃冷冻直至测定药物浓度。将动物断头，除去脑，然后在每克组织中在3mL水中匀浆，并以13,500g离心15分钟。使用与SCIEX API4000 Q-Trap质谱仪结合的Acquity UPLC系统进行样品分析。使用在60℃下操作的AcquityUPLC®BEHC18柱（1.7μm粒径，50×2.1mm ID）分析2μL样品提取物。流速为0.7 mL / min。使用由溶剂A（20/80甲醇/水，10mM乙酸铵）和溶剂B（10mM乙酸铵的甲醇溶液，0.6mL / L 10％乙酸）组成的梯度流动相。每个样品的总运行时间为1.2分钟。 PF-04447943和内标分别在0.61和0.67分钟洗脱。在从m / z 396.2到203.1和m / z 477.3到266.2的转变处以正离子模式监测PF-04447943和内标。使用Analyst 1.4基于重复的标准曲线进行定量。
• 参考文献:

  [1]. Kleiman RJ, et al. Phosphodiesterase 9A regulates central cGMP and modulates responses to cholinergic and monoaminergic perturbation in vivo. J Pharmacol Exp Ther. 2012 May;341(2):396-409.

  [2]. Hutson, P. H, et al. The selective phosphodiesterase 9 (PDE9) inhibitor PF-04447943 (6-[(3S,4S)-4-methyl-1-(pyrimidin-2-ylmethyl)pyrrolidin-3-yl]-1-(tetrahydro-2H-pyran-4-yl)-1,5-dihydro-4H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-one) enhances synaptic plasticity and