| 描述 |
Nirogacestat (PF-3084014) 是一种可逆的非竞争性的选择性的 γ-secretase 抑制剂,IC50 为 6.2 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 6.2 nM (γ-secretase)[1]
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| 体外研究 |
Nirogacestat(PF-03084014)在使用源自HeLa细胞的去污剂溶解膜的Aβ产生的无细胞测定中γ-分泌酶抑制的IC 50被确定为6.2nM。当使用在Notch1中的异二聚化和PEST结构域中都具有突变的HPB-ALL细胞在细胞测定中测试Notch受体切割的抑制时,测定细胞IC50为13.3nM。 Nirogacestat(PF-03084014)引起HPB-ALL和TALL-1细胞中胱天蛋白酶-3活性的显着增加以及在7天处理后诱导裂解的PARP和裂解的胱天蛋白酶-3 [1]。
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| 体内研究 |
Nirogacestat(PF-03084014)在14天每天两次给药的该模型中显示出强大的抗肿瘤活性。肿瘤生长抑制是剂量依赖性的,在高剂量水平(150mg/kg)下获得~92％的最大肿瘤生长抑制。在小鼠每天两次重复给药超过一周的肿瘤生长抑制研究中,Nirogacestat(PF-03084014)在低于100mg/kg的剂量水平下耐受良好,因为未观察到显着的体重减轻,发病率或死亡率。然而,当剂量增加至150mg/kg时,小鼠腹泻并在化合物给药后约10天显示体重减轻(10-15％)。如果给药假期,治疗动物的体重通常会恢复正常,这表明Nirogacestat(PF-03084014)的毒性是可逆的[1]。在7天重复剂量毒代动力学(TK)和首次1个月组合重复剂量研究中,单用地塞米松和地塞米松与Nirogacestat(PF-03084014)治疗引起中度至显着的体重减轻(-10％至-27％)治疗7天后。在第二个1个月组合重复剂量研究中,在100 mg/kg Nirogacestat(PF-03084014)治疗的第一周或第三周重复给药时发生相似的体重减轻(-10％至22％)和1毫克/千克地塞米松。当地塞米松在研究的第二周未与Nirogacestat(PF-03084014)共同给药时,体重增加(4％),表明体重减轻是可逆的[2]。
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| 细胞实验 |
在补充有10％胎牛血清的生长培养基中，将细胞以2,000（Sup-T1，Jurkat和DND-41）或10,000（HPB-ALL或TALL-1）细胞/孔接种于96孔板中。 Nirogacestat（PF-03084014）的系列稀释液在DMSO中进行，向每个孔中加入适当的对照或指定浓度的Nirogacestat（PF-03084014），并将细胞在37℃下孵育7天（最终DMSO含量0.1％） 。将最终浓度为0.1mg / mL的刃天青加入细胞中，并将板温育2至4小时。在560nm激发后，荧光信号被读取为590nm处的发射。通过使用GraphPad Prism [1]中的S形剂量反应（可变斜率）计算IC 50值。
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| 动物实验 |
小鼠[1]使用无胸腺雌性小鼠（nu / nu，6-8周）。对于抗肿瘤效力，将具有150-300mm 3肿瘤的动物随机分成接受载体（0.5％甲基纤维素）或Nirogacestat（PF-03084014）（150mg / kg，在载体中稀释）的组，并通过口服给药。灌胃。每2至3天获得动物体重和肿瘤测量值。用游标卡尺测量肿瘤体积（mm 3）并计算。与载体处理的小鼠相比，在药物处理的研究的最后一天测量百分比（％）抑制值并计算。对于所有肿瘤生长抑制实验，使用每剂量组8至10只小鼠。学生t检验用于确定P值。使用大鼠[2] Sprague-Dawley（SD）大鼠。在7天重复剂量TK研究中，每组3只雄性大鼠口服给予0.5％甲基纤维素载体，Nirogacestat（PF-03084014），150mg / kg /天，Nirogacestat（PF-03084014），150mg / kg /天与1mg口服地塞米松剂量（0.25,1.0,2.5或5.0mg / kg /天）或5mg / kg /天的地塞米松共同给药，并在最后一次给药后24小时安乐死。用于确定Nirogacestat（PF-03084014）或地塞米松平均全身血浆浓度的血液收集时间点是给药后1,2,4,7和24小时。通过评估临床体征，给药前和给药后体重的变化来确定与测试物品相关的发现。在研究的第1天和第7天，在不同时间从所有治疗组收集用于评估Nirogacestat（PF-03084014）和地塞米松的全身暴露的血液样品。在最后一次给药后24小时，还从所有动物收集用于血液学评估的血液样品。治疗大鼠的血液学参数的平均组变化表示为百分比变化。在最后一次给药后24小时进行尸体剖检，记录体重，收集组织并进行组织病理学检查。
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| 参考文献 |
[1]. Wei P, et al. Evaluation of selective gamma-secretase inhibitor PF-03084014 for its antitumor efficacy and gastrointestinal safety to guide optimal clinical trial design. Mol Cancer Ther. 2010 Jun;9(6):1618-28. [2]. Aguirre SA, et al. Intermittent oral coadministration of a gamma secretase inhibitor with dexamethasone mitigates intestinal goblet cell hyperplasia in rats. Toxicol Pathol. 2014;42(2):422-34.
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