668467-91-2

• 常用中文名：LDN-57444
• 常用英文名：LDN-57444
• CAS号：668467-91-2
• 分子式：C₁₇H₁₁Cl₃N₂O₃
• 分子量：397.640
• 相关类别： 生物化工 抑制剂 泛素化抑制剂(Ubiquitin) DUB 抑制剂
• 发布时间：2017-07-22 09:13:31
• 更新时间：2024-01-01 19:15:16
• LDN-57444 是一种可逆的,竞争性的,定向位点的泛素 C 末端水解酶 L1 (UCH-L1) 抑制剂,IC50 和 Ki 值分别为 0.88 μM 和 0.40 μM；LDN-57444 同时可抑制 UCH-L3 的活性,IC50 值为 25 μM。

名称

• 中文名: LDN-57444
• 英文名: 1H-​Indole-​2,​3-​dione, 5-​chloro-​1-​[(2,​5-​dichlorophenyl)​methyl]​-​, 3-​(O-​acetyloxime)
• 英文别名: (3Z)-3-(Acetoxyimino)-5-chloro-1-(2,5-dichlorobenzyl)-1,3-dihydro-2H-indol-2-one; 3-(Acetoxyimino)-5-chloro-1-(2,5-dichlorobenzyl)-1,3-dihydro-2H-indol-2-one; 1H-Indole-2,3-dione, 5-chloro-1-[(2,5-dichlorophenyl)methyl]-, 3-(O-acetyloxime); 1H-Indole-2,3-dione, 5-chloro-1-[(2,5-dichlorophenyl)methyl]-, 3-(O-acetyloxime), (3Z)-; LDN-57444

物化性质

• 密度: 1.5±0.1 g/cm3
• 沸点: 534.4±60.0 °C at 760 mmHg
• 分子式: C₁₇H₁₁Cl₃N₂O₃
• 分子量: 397.640
• 闪点: 277.0±32.9 °C
• 精确质量: 395.983521
• PSA: 58.97000
• LogP: 4.70
• 蒸汽压: 0.0±1.4 mmHg at 25°C
• 折射率: 1.655
• 储存条件: Desiccate at +4°C
• 水溶解性: DMSO: soluble16mg/mL

生物活性

• 描述: LDN-57444 是一种可逆的,竞争性的,定向位点的泛素 C 末端水解酶 L1 (UCH-L1) 抑制剂,IC50 和 Ki 值分别为 0.88 μM 和 0.40 μM；LDN-57444 同时可抑制 UCH-L3 的活性,IC50 值为 25 μM。
• 相关类别:
  信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 去泛素化酶
  研究领域 >> 神经疾病
• 靶点:

  IC50: 0.88 μM (UCH-L1), 25 μM (UCH-L3)[1] Ki: 0.40 μM (UCH-L1)[1]

• 体外研究: LDN-57444是UCH-L1的可逆竞争性抑制剂,IC50为0.88μM,并且还抑制UCH-L3活性,IC50为25μM[1]。 LDN-57444(LDN,5μM,1小时)抑制小鼠脑海马切片中70％的Uch活性。 LDN-57444(5μM,2小时)不会进一步降低APP/PS1切片或暴露于200nMAβ的wt切片中的增强作用[2]。 LDN-57444(25-100μM)在SK-N-SH细胞中剂量依赖性地抑制遍在蛋白-蛋白酶体活性。 LDN-57444(50μM)也诱导凋亡细胞死亡,引起内质网应激并导致SK-N-SH细胞中剪接的XBP-1(XBP-1s,48KD)的表达[3]。
• 体内研究: LDN-57444(0.4 mg/kg,ip)阻断了V-Uch-L1的有益作用,并且在训练后第1,7,14和21天小鼠暴露于上下文时恶化了背景调节性能[2] 。
• 激酶实验: 为了开始测定，将0.5μL的5mg / mL测试化合物（包括LDN-57444，约50μM最终反应浓度）或DMSO对照等分到每个孔中。酶和底物均在UCH反应缓冲液（50mM Tris-HCl [pH 7.6]，0.5mM EDTA，5mM DTT和0.5mg / mL卵清蛋白）中制备。然后向每个孔中加入25μL的0.6nM UCH-L1，除了底物对照孔，然后在自动振荡器上摇板45-60秒。将酶/化合物混合物在室温下孵育30分钟，然后加入25μL的200nM Ub-AMC以引发酶反应。将反应混合物（300μMUCH-L1,100nM泛素-AMC与2.5μg测试化合物）在室温下再孵育30分钟，然后通过每孔加入10μL500mM乙酸淬灭反应。使用香豆素滤光片组（ex = 365nm，em = 450nm）在LJL Analyst上测量荧光发射强度，并通过内在化合物荧光减去荧光发射强度以显示酶活性。 DMSO对照（0.5μLDMSO，25μLUCH-L1,25μL泛素-AMC，10μL乙酸），酶对照（25μLUCH-L1,25μL缓冲液，10μL乙酸） ），底物对照（25μL缓冲液，25μL泛素-AMC，10μL乙酸）和抑制剂对照（0.5μL泛素醛[100 nM原液]，25μLUCH-L1,25μL泛素）在每个测定板中也进行-AMC，10μL乙酸）以确保质量和再现性。使用相同的方案手动重复UCH-L1酶促反应两次以确认来自主要机器人辅助筛选的命中化合物的结果[1]。
• 细胞实验: 通过MTT的定量比色测定法测量细胞活力。药物处理后，将SK-N-SH细胞与5g / L MTT一起温育4小时，然后加入DMSO 15分钟。使用微量板读数器在570nm处量化吸收[3]。
• 动物实验: 将每只动物单独放入调节室中。电流逐渐增加（0.1mA，1秒，30秒间隔，使冲击强度增加0.1mA至0.7mA）。评估动物行为对休克（退缩）的第一次可见反应，第一次极端运动反应（跑/跳）和第一次发声窘迫（尖叫）。通过平均每种动物表现出该类型对足部休克的行为反应的冲击强度，对每只动物量化退缩，跳跃和尖叫的阈值。视觉，运动和动力技能也通过可视平台训练进行测试，测量时间和速度，以达到放置在充满水的池中的可见平台。通过视频跟踪系统记录和分析到达平台和游泳速度的时间。在LDN-57444（LDN）和TAT融合蛋白存在下测试恐惧条件反射的实验中，在不同组的小鼠中没有观察到差异。为了确定LDN-57444的给药时间，进行了一系列初步实验，其中抑制剂以不同的间隔（4小时前，1小时前，1小时后和4小时后）从电中腹膜内注射。休克。在训练阶段，LDN-57444或载体注射小鼠的冷冻没有差异[2]。
• 参考文献:

  [1]. Liu Y, et al. Discovery of inhibitors that elucidate the role of UCH-L1 activity in the H1299 lung cancer cell line. Chem Biol. 2003 Sep;10(9):837-46.

  [2]. Gong B, et al. Ubiquitin hydrolase Uch-L1 rescues beta-amyloid-induced decreases in synaptic function and contextual memory. Cell. 2006 Aug 25;126(4):775-88.

  [3]. Tan YY, et al. Endoplasmic reticulum stress contributes to the cell death induced by UCH-L1 inhibitor. Mol Cell Biochem. 2008 Nov;318(1-2):109-15.

安全

• 符号: GHS09
• 信号词: Warning
• 危害声明: H410
• 警示性声明: P273-P501
• 危害码 (欧洲): N
• 风险声明 (欧洲): 50/53
• 安全声明 (欧洲): 60-61
• 危险品运输编码: UN 3077 9 / PGIII