| 描述 |
M443 是 MRK 的一个不可逆的、特异性抑制剂,其 IC50 值 <125 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: <125 nM (MRK)[1].
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| 体外研究 |
MRK耗尽使IR后的细胞存活率降低33％,在3Gy时控制。类似地,克隆形成测定显示存活率显着降低,剂量增强因子(DEF)为1.6,存活率为10％。在暴露于辐射后30分钟,通过IR激活MRK是最大的。因此,对于后续分析,使用该时间点。在两种细胞培养物中,500nM M443极大地抑制了IR刺激的MRK,Chk2和p38活化。将细胞接种在盖玻片上,用500nM M443或载体预处理,暴露于6Gy IR,在IR后不同时间固定,并用特异性染色有丝分裂细胞的MPM2磷酸特异性抗体进行免疫荧光处理。与对照细胞相反,M443处理的细胞在IR后不能停滞并且保持与未照射的细胞相似的有丝分裂指数。因此,MRK的抑制导致Chk2的抑制和在IR诱导的DNA损伤中不能在细胞周期中停滞[1]。
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| 体内研究 |
对照小鼠在肿瘤细胞植入后的中位数存活32天。单独用M443治疗使这种存活增加5.5天,而选择的低剂量辐射不会显着增加存活率。相反,M443和IR的组合延长了存活期,中位数比对照长16天。用M443处理不影响动物体重,因为在动物濒死前几天在所有组中观察到观察到的体重减轻。显示含有肿瘤的部分具有升高的总MRK和活性MRK水平(载体处理的脑中的泳道RB)。相反,来自M443处理的脑的含肿瘤部分显示出MRK活性的完全丧失。有趣的是,含有正常脑的部分,在对照脑中显示出一定程度的MRK蛋白,在治疗过的脑中也失去了MRK,这表明M443在整个小脑中的扩散也抑制了正常的MRK [1]。
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| 细胞实验 |
用siRNA转染后两天，将成神经管细胞瘤细胞接种在96孔板中，第二天，将它们暴露于不同剂量的辐射。通过595nm处的MTT吸光度在放射治疗后72小时测定细胞活力。对于用M443（250nM，500nM）处理的细胞，在用不同浓度的药物或载体对照处理6小时后，将它们暴露于辐射并如上所述在72小时后进行MTT测定。在siRNA转染后2天，将5百个细胞接种在6cm培养皿中。第二天，使用生物辐照器将细胞暴露于不同剂量的辐射，并培养7天，每隔一天更换培养基。计数含有超过50个细胞的集落，并将结果用于计算存活分数。对于用M443或载体对照处理，接种后24小时，将细胞暴露于药物6小时，然后进行辐射[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[1]原发性UI226成神经管细胞瘤细胞是源自患者的异种移植物。 UI226主要在裸鼠中作为侧翼培养物繁殖，并在颅内注射前在StemPro培养基中培养不到3周。将成神经管细胞瘤细胞（在5mL StemPro培养基中5.0×105UI226）在5分钟内注射到4周龄无胸腺雌性小鼠的小脑中。肿瘤细胞植入后3周，动物濒死前约2周;通过植入填充有0.05mg / mL M443溶液或载体（0.01％DMSO的PBS溶液）的渗透泵开始治疗，并植入动物背侧的皮下袋中。具有附接套管的导管在2周的时间内以0.25mL /小时的稳定速率将药物颅内并直接递送到肿瘤中。在泵植入后2天开始照射小鼠头部，并在2天内进行[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Markowitz D, et al. Pharmacological Inhibition of the Protein Kinase MRK/ZAK Radiosensitizes Medulloblastoma. Mol Cancer Ther. 2016 Aug;15(8):1799-808.
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