| 描述 |
EPZ015666 是有口服活性的 PRMT5抑制剂,IC50 为 22 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 22 nM (PRMT5)[1]
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| 体外研究 |
用EPZ015666处理MCL细胞系导致SmD3甲基化和细胞死亡的抑制,IC50值在纳摩尔范围内[1]。 EPZ015666,一种有效的肽竞争性和SAM合作抑制剂,相对于其他甲基转移酶,对PRMT5具有> 10,000倍的特异性[2]。
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| 体内研究 |
EPZ015666是口服生物可利用的并且适合于体内研究。我们对携带皮下Z-138和Maver-1异种移植物的严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠进行了21天的功效研究,每天两次(BID)口服给药4个剂量组：每公斤25,50,100和200毫克体重(mg/kg)。在连续给药21天后,对动物实施安乐死,并分析血液和组织以确定甲基标记药效学和肿瘤生长抑制(TGI)之间的关系。在两种MCL模型中,EPZ015666在21天后显示剂量依赖性暴露和TGI。与载体治疗的肿瘤相比,在第21天测量的所有EPZ015666剂量组中的肿瘤显示出重量,体积和肿瘤生长的统计学显着差异。以200mg/kg BID给药诱导Z-138细胞中的肿瘤停滞,21天后具有> 93％TGI,而Maver-1细胞显示> 70％TGI。另外,使用Granta-519细胞系测试第三次MCL异种移植物,该细胞系是在第18天达到终点的快速生长模型,并且在200mg/kg组中显示出剂量依赖性功效,45％TGI。 EPZ015666在所有三种模型中都具有良好的耐受性,在200mg/kg剂量组中体重损失最小,没有其他临床观察[1]。
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| 激酶实验 |
将EPZ015666从1,000至0.051nM连续稀释三倍，并点样到384孔聚丙烯V底微孔板中。将3H-SAM在测定缓冲液中连续稀释两倍，用于七浓度稀释系列，最高浓度为700nM（最终测定浓度）。通过添加4nM酶和40nM肽（两者的最终测定浓度）开始反应。将反应温育60分钟，并通过在测定缓冲液中加入10μL/孔的600μM未标记的SAM（最终测定浓度）来猝灭。对于肽竞争，EPZ015666从1,000至0.051nM连续稀释三倍，并点样到384孔聚丙烯V底微孔板中。将肽在测定缓冲液中连续稀释两倍，得到七峰稀释系列，最高浓度为480nM（最终测定浓度）。通过加入4nM酶和75nM 3H-SAM（两者的最终测定浓度）引发反应。将反应物温育60分钟，并通过在测定缓冲液中加入10μL每孔600μM未标记的SAM（最终测定浓度）来淬灭反应[1]。
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| 细胞实验 |
线性/对数生长的培养细胞在2-20mL培养基中分裂成2×10 5个细胞/ mL的接种密度，这取决于生长期结束时所需的产量。将化合物在DMSO中稀释并加入到每个培养容器中，DMSO的最终浓度为0.2％。使细胞不受干扰地生长96小时。在每个处理期结束时，通过离心（5分钟，1,200rpm）收获细胞，并用PBS冲洗细胞沉淀一次，然后在干冰上冷冻，等待进一步处理。对所有MCL系进行长期增殖测定，根据每种细胞系的生长特征对初始接种密度稍作调整。所有测定均进行12天[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[1]雄性CD-1小鼠（25-40g; n = 6，每个时间点3只）用单剂量的EPZ015666以2mg / kg静脉尾静脉注射和10mg / kg口服强饲法给药，两种剂量均配制在20％NN-二甲基乙酰胺的水溶液中。将动物禁食过夜并在给药当天给药前称重。通过下颌下或眼眶后出血以预先指定的时间间隔（7个时间点）从动物中取出约30μL血液。对于最后一个时间点（24小时），在动物麻醉（70％CO 2：30％O 2）的同时通过心脏穿刺收集样品。将血液样品转移到K2-EDTA管中并置于湿冰上，然后在4℃（3,000g，15分钟）离心以在样品收集后30分钟内获得血浆。在蛋白质沉淀和LC-MS / MS分析之前，将血浆样品储存在-70±10℃。我们通过分析一系列含有100 ng / mL拉贝洛尔作为内标的对照血浆等分试样和1-3,000 ng / mL EPZ015666来构建标准校准曲线。分析中还包括四个级别的质量控制（3-2,400 ng / mL EPZ015666）。使用Phoenix WinNonlin 6.2.1分析数据。
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| 参考文献 |
[1]. Chan-Penebre E, et al. A selective inhibitor of PRMT5 with in vivo and in vitro potency in MCL models. Nat Chem Biol. 2015 Jun;11(6):432-7. [2]. Kryukov GV, et al. MTAP deletion confers enhanced dependency on the PRMT5 arginine methyltransferase in cancer cells. Science. 2016 Mar 11;351(6278):1214-8.
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