| 描述 |
AVE 0991是非多肽,有口服活性的血管紧张素-(1-7)受体激动剂,IC50 为21 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 21±35 nM (Ang-(1-7) receptor)[1]
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| 体外研究 |
AVE 0991是一种非肽化合物,其在内皮上引起类似于Ang-(1-7)的作用。 AVE 0991和未标记的Ang-(1-7)竞争[125 I] -Ang-(1-7)与牛主动脉内皮细胞膜的高亲和力结合,IC 50分别为21±35和220±280nM。 AVE 0991钠盐和Ang-(1-7)(均为10μM)的NO和O2释放峰值浓度没有显着差异(NO：295±20和270±25 nM; O2-：18±2和20 ±4 nM)。然而,与Ang-(1-7)相比,AVE 0991的生物活性NO释放量高约5倍[1]。
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| 体内研究 |
与媒介物处理的动物相比,AVE 0991(0.58nmol/g)在WT小鼠中产生水利尿的显着降低(0.06±0.03mL对比0.27±0.05;每组n = 9; P <0.01)。 AVE 0991(AVE)的抗利尿作用与尿渗透压的增加相关(1669±231.0mOsm/KgH2O对载体处理的小鼠中的681.1±165.8mOsm/KgH2O; P <0.01)。 Mas的遗传缺失消除了AVE 0991在水负荷期间的抗利尿作用(在AVE 0991处理的小鼠中0.37±0.10mL [n = 9]对0.27±0.03mL [n = 11])。如在C57BL/6小鼠中观察到的,在载水瑞士小鼠中施用AVE 0991(0.58nmol/g)也与载体处理的动物相比产生显着的尿量减少(0.13±0.05mL [n = 16]对比0.51±0.04 mL [n = 40]; P <0.01)[2]。用AVE-0991治疗一周后,灌注压显着降低(载体治疗大鼠为56.55±0.86 vs. 68.73±0.69 mmHg),收缩期张力增加(11.40±0.05对比载体中9.84±0.15 g)处理大鼠),张力上升率(+ dT/dt;载体处理大鼠为184.30±0.50对155.20±1.97 g/s),张力下降率(-dT/dt; 179.60±1.39对150.80±2.42)载体处理的大鼠中的g/s)。心率(HR)略有增加(载体治疗大鼠为220.40±0.71对214.20±0.74次/分钟[3]。
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| 激酶实验 |
进行[125 I] -Ang-（1-7）的结合。简言之，将来自原代培养的牛主动脉内皮细胞（BAEC，第1代）的100μg膜在25℃下在HEPES缓冲盐水（10mM HEPES，0.1M NaCl，5）中以200μL的总体积温育45分钟。含有0.2％BSA的mM MgCl 2和蛋白酶抑制剂混合物Complete（Boehringer Mannheim）。通过减去非特异性结合（40％至50％）来计算[125 I] -Ang-（1-7）的可饱和结合，在10μM未标记的Ang-（1-7）存在下测定总结合。在10nM [125 I] -Ang-（1-7）存在下进行增加浓度的AVE 0991和未标记的Ang-（1-7）的竞争实验。通过在预浸有1％BSA的Durapore过滤器（0.65μm，Opak 96孔板）上真空过滤（≤15mmHg）终止测定。用每100μLPBS（50mM，NaHPO 4和0.15M NaCl，pH 7.2）洗涤滤膜3次。用γ计数器[1]量化干燥过滤器上的放射性。
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| 细胞实验 |
猴肾（COS）细胞和中国仓鼠卵巢（CHO）细胞用巨细胞病毒启动子驱动的大鼠Mas cDNA稳定转染，并用新霉素选择。将125I-Ang-（1-7）（0.5×10-9mol / L）在24孔板中于4℃在0.3mL补充有0.2％BSA的无血清培养基（DMEM）中孵育60分钟，在存在或不存在AVE 0991（AVE，10-10至-5mol / L）的情况下，0.005％杆菌肽，0.1mol / L PMSF和0.5mol / L邻二氮杂菲与Mas转染的COS细胞。用冰冷的无血清DMEM洗涤2次后，用0.1％Triton X-100破碎细胞。在γ计数器中测量结合的放射性。在存在或不存在AVE的情况下，使用2×10-9mol / L罗丹明标记的Ang-（1-7）在类似条件下进行罗丹明-Eng-（1-7）在Mas转染的CHO细胞中的结合（ 10-6mol / L），CV11974（10-6mol / L）或PD123319（10-6mol / L）。 NSB在10-6 mol / L Ang-（1-7）[1]存在下测定。
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| 动物实验 |
使用小鼠[2]瑞士雄性小鼠，纯遗传背景C57BL / 6上的Mas-KO（Mas - / - ）雄性小鼠和WT C57BL / 6对照小鼠（Mas + / +）。在清醒小鼠中通过腹膜内注射水（0.05mL / g体重[BW]）诱导水利尿。药物以相同的注射剂量施用，在预定体积（0.01mL / g BW）下用水负荷。在第一组实验中，WT小鼠（C57BL / 6，对照组）或Mas-KO小鼠用以下物质处理：（1）0.58nmol / g AVE 0991（n = 9，对照; n = 11，Mas-KO小鼠） ）;或（2）AVE 0991的载体（10μMKOH，0.01mL / g; n = 9，对照; n = 9，Mas-KO）。在第二组中，瑞士小鼠用以下物质治疗：（1）载体（n = 36）; （2）0.58nmol / g AVE 0991（n = 16）; （3）46pmol / g Ang-（1-7）拮抗剂A-779（n = 4）; （4）2 nmol / g氯沙坦或缬沙坦（n = 5）; （5）2nmol / g AT2受体拮抗剂PD123319或PD123177（n = 9）; （6）AVE 0991与A-779结合; （7）AVE 0991与氯沙坦或缬沙坦合用（每组n = 4）; （8）或AVE 0991与PD123319（n = 5）或PD123177（n = 4）组合。在加载水后测量尿量60分钟，并获得尿样以确定重量摩尔渗透压浓度。 AVE 0991的剂量基于在瑞士小鼠中进行的初步实验。大鼠[3]使用重量为250-300g的雄性Wistar大鼠。通过管饲法口服施用AVE-0991（1mg / kg，n = 9）或载体（0.9％NaCl，n = 11）处理大鼠。在AVE-0991治疗的7天结束时，在腹膜内注射400IU肝素后10-15分钟将动物断头。打开胸腔后，仔细解剖心脏，从胸腔取出，放入含有冰冷的Krebs-Ringer溶液（KRS）的平板中，以减轻主动脉夹层切除过程中任何潜在的心脏损伤。
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| 参考文献 |
[1]. Wiemer G, et al. AVE 0991, a nonpeptide mimic of the effects of angiotensin-(1-7) on the endothelium. Hypertension. 2002 Dec;40(6):847-52. [2]. Pinheiro SV, et al. Nonpeptide AVE 0991 is an angiotensin-(1-7) receptor Mas agonist in the mouse kidney. Hypertension. 2004 Oct;44(4):490-6. [3]. Ferreira AJ, et al. The nonpeptide angiotensin-(1-7) receptor Mas agonist AVE-0991 attenuates heart failure induced by myocardial infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2007 Feb;292(2):H1113-9. [4]. Mo J, et al. AVE 0991 attenuates oxidative stress and neuronal apoptosis via Mas/PKA/CREB/UCP-2 pathway after subarachnoid hemorrhage in rats. Redox Biol. 2018 Sep 28;20:75-86.
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